MAS:新型快速样品前处理方法

0 2020-05-27

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现代前处理技术在要求净化效果的同时,越来越追求方法的快速及易操作性,MAS方法,作为一种多重机制杂质吸附萃取快速净化法也应运而生.

图1. MAS方法流程示意图，SPE柱管形式。

现代前处理技术在要求净化效果的同时，越来越追求方法的快速及易操作性，MAS方法，作为一种多重机制杂质吸附萃取快速净化法也应运而生。

MAS（Multi-function Impurity Adsorption SPE）利用“多重机制杂质吸附萃取净化法”将基质分散固相萃取推广到了兽药残留、食品添加剂和药物代谢分析方面。该方法主要通过多官能化的复合吸附材料，将生物样品中的主要干扰杂质吸附，同时将强水溶性的被测物质留在样品溶液中，而达到净化和富集的目的。

MAS应用离子交换原理，有效地去除了生物样品中的蛋白质干扰，且对药代分析中的干扰物质——磷脂，有较好的去除效果。根据不同领域的需要，对于农残、兽残及食品添加剂的检测，多采用离心管形式，同时加入样品和净化填料，同时进行提取和净化。而对于药代检测，由于样品量小，多采用将填料装入塑料管中或96孔板中进行操作，净化柱活化后直接上样，加入乙腈沉淀蛋白，再加入适当的洗脱液进行洗脱，在柱管中实现了样品的蛋白沉淀和进一步的净化工作。

图2. MAS方法流程示意图，离心管形式。

药物代谢分析领域中血浆样品一般都采用直接蛋白沉淀法和常规SPE法来进行样品前处理，其中蛋白直接沉淀更多地偏重于血浆样品中大分子蛋白的去除，与其相比，SPE可以更好地去除小分子蛋白，图3是用蛋白直接沉淀、常规SPE、MAS方法处理过的牛血清空白样品的色谱图，由图中可以看出，常规SPE处理过的血清样品色谱图2.5min前的杂质峰更少，而在2.5min后却又有两个明显的色谱干扰峰。正是证明了SPE对于大分子物质去除效果更好，而对于某些小分子蛋白却无法彻底清除。

图3. MAS方法与常规SPE及蛋白直接沉淀法的蛋白去除效果比较。其中蓝色为直接蛋白沉淀；绿色为HLB净化；粉色为MAS柱管形式净化；墨绿色为MAS离心管形式净化。

MAS方法的开发正是为了解决这一问题，可以看到，MAS方法处理过的样品色谱图在2.5min后几乎没有任何干扰，而在2.5min前的干扰峰也比直接蛋白沉淀方法有了明显的减少。这是因为MAS方法同时结合了蛋白沉淀与SPE吸附，酸化乙腈既作为蛋白沉淀剂又等同于提取液，且方法简单、快速，便于操作，实验证明对于血浆中的雷尼替丁有很好的添加回收率。同时通过质谱扫描磷脂的特征离子，如图4可以看出比较蛋白直接沉淀方法和反相SPE方法，磷脂特征离子的响应值有一至两个数量级的减小。

图4. 一级质谱扫描图m/z=496 特征离子比较。

MAS方法应用实例

生物样品中三聚氰胺的检测

1．样品前处理

称取鲜奶样品15g试样于三聚氰胺MAS净化管中，加入60g/L磺基水杨酸3ml，0.1mol/L HCl水溶液7ml，涡旋振荡2min，离心（10000prm），取上清液2ml过0.45μm的滤膜，供液相色谱检测使用。

表1. MAS方法、蛋白沉淀及常规SPE的比较

2．液相色谱条件

色谱柱：Venusil SCX-M色谱柱，4.6×250mm, 5μm, 300?；流动相：磷酸二氢钾（0.05 mol/L）：乙腈=70：30；流速：1.5 ml/min；柱温：室温；波长：240 nm，进样量均为20 μl。

图5. 牛奶样品添加1ppm三聚氰胺标品色谱图。

3.实验结果

用空白样品加标方法进行回收率和精密度实验，对空白牛奶进行三个不同水平的加标，每个水平平行测定3次，计算回收率和相对标准偏差，结果见表2。从表2可以看出当添加水平在1.0~10.0 mg/kg范围内，回收率均可在 95%~102%之间，相对标准偏差小于5%。牛奶样品的加标回收谱图见图5。

表2. 牛奶样品添加回收率表

血清样品中雷尼替丁的检测

1．样品前处理

Cleanert PSA 固相萃取柱 250mg/3ml；活化：3ml乙腈；上样：0.5ml；洗脱：5 ml 2%甲酸乙腈：水=80：20；过膜，氮吹至干，1ml流动相定容。

图6. 牛血清样品中雷尼替丁的添加回收色谱图。

2．液相色谱条件

色谱柱：Venusil ASB C18，4.6×150，5μm，150?；流动相：醋酸钠缓冲盐（3.854g三水合醋酸钠+2ml乙酸定容到500ml）：乙腈=90：10；进样量：20 ml；柱温：室温；波长：320nm。

表3. 牛血清样品添加回收率表

3.实验结果

Cleanert PSA固相萃取柱对牛血清样品进行净化，对其中的雷尼替丁进行添加回收实验，得到了很好的回收率和精密度结果。可以看出MAS方法适用于血样的快速净化，通过一支固相萃取柱，洗脱液对样品同时进行蛋白沉淀和净化。实验结果见表3，添加水平在 0.5~5.0mg/kg范围内，回收率均可在 77%~87%之间，相对标准偏差小于2%。血清样品的加标回收谱图见图6。

内容来源：本网

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