苏丹红Ⅰ- Ⅳ的同时测定

马忠祥张晓辉 0 2020-05-27

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非食用色素是不能作为食品添加剂在食品中使用的色素,主要指一些工业用的化学合成染料.

图1. 辣椒酱提取物凝胶净化色谱图。

非食用色素是不能作为食品添加剂在食品中使用的色素，主要指一些工业用的化学合成染料。在众多非食用色素污染食品事件中,辣椒制品中非食用色素的污染备受关注。辣椒制品中非法掺加的非食用色素主要是一些脂溶性红色色素,其中最具代表性的是苏丹红类色素。本文采用LabTech AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统对辣椒酱样品进行净化并采用HPLC分析其中的苏丹红Ⅰ- Ⅳ，回收率在93.6%~101.7%之间，RSD小于8%，该方法灵敏可靠，适合于辣椒酱中苏丹红Ⅰ- Ⅳ的同时检测。

苏丹红(Sudan dyes)是一种人工合成的油溶性偶氮类化工染料,广泛用于溶剂、油、蜡的增色以及鞋、地板的增光，分为苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四种,都有致癌毒性,其中苏丹红Ⅳ毒性最大,已被国际癌症研究机构列为三类致癌物之一,苏丹红禁止作为色素添加剂在食品和饲料中使用。

本文建立了凝胶柱净化-高效液相色谱法检测辣椒酱中苏丹红色素的方法，与国标方法相比，操作简便，取得了理想的结果。

实验部分

仪器与试剂

GPC AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统（莱伯泰科），LC600高效液相色谱系统（莱伯泰科）。

苏丹红Ⅰ-Ⅳ（中国标准物质中心），乙腈（色谱纯，Fischer公司），甲醇（色谱纯，Fischer公司），乙酸乙酯（AR.，北京试剂厂），环己烷（AR，北京试剂厂），正己烷（AR，北京试剂厂）。

图2. 苏丹红标准凝胶净化色谱图。

标准溶液配制

苏丹红标准储贮备液：分别精密称取10mg苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ溶于少量乙腈,移入250 ml容量瓶中加乙腈至刻度，混匀，每升含苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各40 mg；

HPLC苏丹红标准溶液：吸取标准储备液0.1、0.2、0.4、0.8、1.6 ml，用乙腈定容至25 ml 容量瓶，此标准系列的浓度分别为0.16、 0.32、 0.64、 1.28、2.56 mg/L；

凝胶净化苏丹红标准溶液：吸取标准储备液0.4 ml，用乙酸乙酯：环己烷（1:1）定容至25 ml 容量瓶，此标准系列的浓度为0.64 mg/L。

样品提取

称取10.00g样品于离心管中，加10ml水将其分散成糊状，加入20ml正己烷，匀浆5min，3000rpm离心10min，取出正己烷，再加入10ml正己烷，并重复提取2次，合并3次提取液，加入无水硫酸钠5g脱水，过滤后于旋转蒸发仪上蒸干，加入5 ml乙酸乙酯：环己烷（1:1）充分溶解，作为待净化样品。

图3. 辣椒酱苏丹红加标色谱图。

样品净化

采用LabTech AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统，采用LabTech SX-3凝胶净化住（25mm×300mm）。

在AutoClean控制软件上编制辣椒酱中苏丹红净化方法：输液泵流速5 ml/min，满环进样（2 ml），检测器检测波长254nm，进样针清洗次数2次，每次清洗体积3 ml。

采用时间窗收集模式，凝胶净化苏丹红标准溶液再凝胶净化系统中的流出特征，确定收集时间为12~24 min。

色谱条件

色谱柱：LabTech C18（250 mm × 4.5mm，5μm）；柱温：35℃；流动相：乙酸水(165+1000) ：乙腈= 10: 90；流速：1ml/min；进样量：20 μl。

图4. 苏丹红时间重复性。

结果与讨论

凝胶净化条件

凝胶净化系统是根据分子体积的大小将干扰分析的大分子及小分子物质去除，同时收集分析组分，从而达到样品净化的目的。所以凝胶净化能达到良好的样品净化的基础是目标分析物和干扰杂质有着不同的凝胶渗透色谱流出特征。

分别对辣椒酱提取物，苏丹红标准品，在AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统上进样，得到相应的色谱图（见图1、图2）。可以发现，苏丹红样品的流出时间为14~24 min，而辣椒酱色谱图表明在15 min前提取的物质已经基本流出，故AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统可以彻底去除辣椒酱提取5种对苏丹红分析的干扰物质（见图3）。

凝胶净化系统依据色谱留出时间进行净化，故目标分析物的流出时间重现性对净化效果的重复性有着重要作用，此实验中对苏丹红在AutoClean全自动凝胶渗析色谱净化系统中的流出时间重现性进行了考察（图4），依次进行5次进样，苏丹红标准样品的保留时间分别为17.934、17.900、17.850、17.916、17.884 min，具有良好的时间重复性。

图5. 苏丹红Ⅰ-Ⅳ液相色谱图（此次为苏丹红Ⅰ、苏丹红Ⅱ、苏丹红Ⅲ、苏丹红Ⅳ）。