液相色谱仪常见故障解决要点及使用分析

实验与分析 0 2020-09-09

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液相色谱仪高效液相色谱

既使日常精心维护的液相色谱仪,随着使用时间的增加或使用者经验不足也会出现一些问题或故障

液相色谱仪是我们实验室常用的大型分析仪器之一，良好的使用习惯和规范的操作可以使工作顺利完成，但是即使日常精心维护液相色谱仪，随着使用时间的增加或使用者经验不足也会出现一些问题或故障。现将液相色谱仪容易出现的故障及解决办法介绍如下：

1.保留时间变化

保留时间的变化有三中情况：波动、缩短、延长。

保留时间出现波动时，应检查柱温是否处于恒温状态，如果设置为室温，气温的变化

会引起保留时间的波动，应该设置为恒定温度;等度和梯度间还没有充分达到平衡状态时，应该用十倍以上柱体积的流动相去平衡色谱柱;缓冲液浓度太低时也会造成保留时间漂移，应换用>25mmol/L的缓冲液;色谱柱被污染或已经接近柱寿命时，应更换保护柱或换新色谱柱。

保留时间缩短时，流速增加，应检查流速的设定;柱温高时，应检查柱温的设置;进样量太大时，减少样品用量或降低样品浓度;流动相的组成发生了改变，比如流动相中易挥发有机相蒸发，两相之间互溶不好，会导致流动相不均匀或某一相出现部分沉淀;流动相的PH值应保持3~7.5范围内，否则会引起柱键合相的流失。

保留时间延长时，流速减小，应检查流速的设定和管路是否有泄露;柱温低时，检查

柱温的设置;流动相的组成发生了改变，比如流动相中易挥发有机相蒸发，两相之间互溶不好，会导致流动相不均匀或某一相出现部分沉淀;检查流动相的pH值是否3~7.5范围内，否则会引起柱键合相的流失。

2.峰拖尾

色谱柱超载时，要减少进样量或稀释样品或使用高溶量的色谱柱;色谱柱性能不佳时，更换色谱柱;死体积或柱外体积过大时，将连接降至最低，并对所有连接点作合理的调整，尽可能采用细内径的连接;加入硅羟基，其作用是纯化色谱柱，增加缓冲液的浓度，降低流动相的pH值，纯化样品;出现峰干扰时，应清洁样品，调整流动相。

3.峰展宽

进样体积过大时，用流动相配样;样品过载时，进小浓度、小体积样品;在进样阀中

造成峰扩展时，进样前后排出气泡，以降低扩散;流动相粘度过高时，提高柱温，并采用低粘度流动相;等度洗脱，保留时间过长时，要增加流速或改用梯度洗脱;柱外体积过大时，[1]将连接管径和连结管降至最小。

4.基线噪声

流动相或检测器中有气泡时，要对流动相进行脱气处理;检测器灯有连续噪声时，更

换氘灯;出现由污染引起的随机噪声时，应清洗色谱柱、净化样品、使用HPLC级试剂;偶然有噪声时，可能是来自电源的干扰，如果电压不稳时，应采用稳压电源。

5.肩峰或分叉

进样量太大或样品浓度过高时，要减少进样量或稀释样品;样品溶剂太强时，应使用弱的样品溶剂;色谱柱性能欠佳时，应更换色谱柱。

6鬼峰

色谱柱未达到平衡时，要继续平衡色谱柱;样品中溶剂出峰时，使用流动相作样品的

溶剂;出现进样阀残余峰时，使用强溶剂清洗进样阀，并改进阀和样品的清洗程序;流动相用水不合格率，应使用HPLC级的水。

使用注意事项

等度洗脱在使用混合溶剂作流动相时，一定要先混合，再过0.45um滤膜;等流动相恢复至室温，用超声波或He气进行脱气处理后，方可使用。

更换流动相时，必须按一定的程序进行，否则会产生问题。更换流动相有三种情况：互溶性流动相的更换、无互溶性流动相的更换和缓冲溶液的更换。对于第一种情况，先用准备更换的流动相把吸滤器完全清洗干净，再打开仪器的排液阀，按清洗键，清洗泵中的流动相。

将吸滤器放入新流动项中，减慢流速清洗数分钟后关闭排液阀。接下来清洗色谱柱和检测器检测池直到基线平稳。对于第二种情况，先用与新旧流动相都互溶的中间清洗液(如：异丙醇)清洗，再用新流动相清洗，具体过程与第一种情况相同。对于第三情况，应先用蒸馏水作为中间清洗液进行清洗，再用新流动相清洗即可。

小结：液相色谱使用中常见保留时间变化的原因简述如上，更换流动相时应注意互溶性，避免析出，良好的操作使用规范不仅能延长仪器的使用寿命还可以提高工作效率，这些知识点你都学会了吗？

内容来源：中国化工仪器网

责任编辑：展源

审　　核：何发