【干货】常用流动相改性剂总结
标化合物不能非常顺利的洗脱,从而产生拖尾。扫尾剂:峰前伸或拖尾时,在流动相中加入一定的物质使峰型变好,不同的物质加的就不同啊,比如做酸加酸,做碱加碱,还有的加缓冲盐的,要具体分析的才行啊象我们常用的的TFA或三乙胺,等都是啊反相高效液相色潽法中常用的扫尾剂为 醋酸铵、三乙胺、二乙胺、乙腈等
流动相改性剂
①常规改性剂 a.酸性试剂有醋酸、甲酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、高氯酸。 b.
我们在做液相色谱实验时经常会遇到各种峰形问题,针对不同原因的峰形异常我们会有不同的解决办法,跟小析姐一起来看看我们常见问题的解决小妙招吧。
C18柱是在分析碱性物质中最常用的固定相。由于十八烷基碳链很长,在键合的时候空间位阻会很大,导致键合率不高,容易残留有大量未键合的硅羟基。在很多流动相条件下,这些游离的硅羟基容易电离,与碱性化合物电离出来的阳离子产生二级作用,导致目标化合物不能非常顺利的洗脱,从而产生拖尾。
扫尾剂:峰前伸或拖尾时,在流动相中加入一定的物质使峰型变好,不同的物质加的就不同啊,比如做酸加酸,做碱加碱,还有的加缓冲盐的,要具体分析的才行啊象我们常用的的TFA或三乙胺,等都是啊
反相高效液相色潽法中常用的扫尾剂为 醋酸铵、三乙胺、二乙胺、乙腈等
a.酸性试剂有醋酸、甲酸、硫酸、磷酸、三氟乙酸、高氯酸。
b.盐酸中氯离子对不锈钢管路有腐蚀作用,极少加到流动相中;
c.硝酸有氧化性,可用于管路的清洗,不建议单独添加到流动相中。
d.碱性试剂有氨水、氢氧化钠、氢氧化钾、三乙胺、二乙胺等。
三乙胺是改性剂,通常加在反相或离子对流动相中,主要的作用是减少样品中碱性组分的拖尾。因为C18键合相上残留的硅羟基容易与碱性化合物结合而造成峰脱尾,所以,在流动相中加入碱性的三乙胺后可以首先与硅羟基结合,从而阻碍了样品中碱性化合物与硅羟基的作用,减少了峰拖尾。一般用量在10-20 mM或流动相体积的0.1-0.3%。在实际使用过程中,建议不要单独使用碱性三乙胺,最好与其它试剂组成缓冲体系。
1)三乙胺的碱性很强,加入三乙胺后流动相的pH可能超出色谱柱的使用范围,对色谱柱造成损伤。pH的改变也会导致出峰时间的显著变化,可能引起的其它问题,建议流动相中加入三乙胺后回调至未加入前的pH值。通常即使pH回调过后,由于三乙胺成为了固定相的一部分,保留时间也有较大变化;
2)三乙胺在210nm处有比较强的吸收,如果液相方法中检测波长在210nm以下测定时需要谨慎使用。无机(有机)盐种类很多,往往组成缓冲系统,比较常用的有醋酸钠、醋酸铵、甲酸钠、甲酸铵、磷酸二氢钾(钠、铵)、磷酸氢二钾(钠、铵)、硫酸钾(钠)、其它的还有酒石酸钾钠、柠檬酸钠、草酸钠、EDTA、碳酸铵等。
流动相中加入离子对试剂后,它可以与被分析物(多为在溶液中带与离子对试剂相反的电荷)结合成离子对而呈电中性,这样非极性就表现出来,从而增加了在反相色谱柱上的保留作用。这种分离模式叫做反相离子对色谱。
a.酸性化合物:最常见是四丁基氢氧化胺(TBA)、四丁基氯化胺、四丁基溴化胺
四丁基铵盐在pH值等于7.5的条件下与强酸和弱酸形成离子对并具有缓冲抑制弱碱的作用;
b.碱性化合物:庚烷磺酸钠、己烷磺酸钠、辛烷磺酸钠和十二烷基磺酸钠等。
多烷基磺酸盐在pH值等于3.5的条件下与强碱和弱碱形成离子对并缓冲抑制弱酸离子。
PS:流动相改性剂,分析纯少量加入基本可以满足要求。但离子对试剂则要求色谱纯,分析纯的往往不能满足分析要求。
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