一、按分离机制分类

1.液-液分配色谱

正相色谱（NP-HPLC）：固定相极性高于流动相（如硅胶键合氨基、氰基），适用于极性化合物分离（如脂溶性维生素）。

反相色谱（RP-HPLC）：固定相极性低于流动相（如C18/C8键合硅胶），应用最广泛（占比70%-80%），适合非极性或弱极性物质（如药物、氨基酸）。

化学键合相色谱：通过化学反应将固定相键合于载体表面，避免固定相流失，提升稳定性。

2.液-固吸附色谱固定相为吸附剂（如硅胶、氧化铝），基于物质吸附能力的差异分离，常用于几何异构体或中等分子量非离子性物质。

3.离子交换色谱

利用离子交换树脂与待测物电荷作用分离，适用于离子化合物（如无机盐、有机酸/碱）及生物大分子（蛋白质、核酸）。

4.体积排阻色谱（凝胶色谱）

按分子尺寸差异分离，固定相为多孔凝胶（如琼脂糖），适合高分子量物质（如蛋白质、多糖）的纯化分析。

5.亲和色谱

基于生物特异性相互作用（如抗原-抗体、酶-底物），用于高选择性分离生物活性物质（如抗体、酶）。

二、按技术升级分类

1.经典液相色谱

这是早期的液相色谱形式，依靠重力让流动相通过固定相来实现分离，操作简单但分离效率较低，分析速度慢，常用于一些较为简单、对分离要求不高的物质初步分离，比如在早期对天然产物粗提物进行初步的组分分离等。

2.高效液相色谱（HPLC）

高压方面：采用高压输液泵，使流动相能以较高压力快速通过装填有很细固定相颗粒的色谱柱，极大提高了分离效率，缩短分析时间。

高效方面：固定相的粒径更小、均匀性更好，柱效显著提升，能够实现复杂混合物的精细分离，像药物杂质分析、食品中多种成分的检测等都常用到它。

高灵敏度检测：配备了多种高灵敏度的检测器，例如紫外检测器、荧光检测器等，可以检测到很低含量的物质。

3.超高效液相色谱（UPLC）

更高的压力和流速：相较于HPLC，能耐受更高的压力，使得流动相以更快流速通过更短且粒径更小的填料色谱柱，进一步加快分析速度，有的分析时间可缩短至HPLC的数分之一。

超高分离效率：凭借其先进的填料技术和高压高速运行特点，可实现更窄的色谱峰宽、更好的分离度，对于成分复杂且性质相近的物质分离效果更为出色，在生物大分子、复杂天然产物等精细分析领域应用广泛。

三、按应用场景分类

1.制备型HPLC

用于大规模纯化化合物（如药物中间体、天然产物），柱容量大，分离效率高。

2.分析型HPLC

专注于定性定量检测，灵敏度高（如紫外检测下限达10⁻¹¹ g/mL），适用于痕量分析。

四、特殊功能类型

1.离子对色谱

在流动相中加入离子对试剂，用于强极性物质（如有机酸/碱）的分离。

2.手性色谱

使用手性固定相拆分对映异构体，在药物质量控制中尤为重要。

HPLC的核心分类依据是分离原理，实际应用中常结合多种技术（如与质谱联用LC-MS）扩展功能。我们可以根据样品性质（极性、分子量、电荷）选择合适类型，例如反相色谱适合多数有机物，离子交换色谱适合带电物质，凝胶色谱适合大分子分离。

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