【收藏】液质联用仪实操指南
液质联用仪（LC-MS）是药物分析、环境检测、食品安检等领域的“核心武器”，兼具液相色谱的高分离能力与质谱的高灵敏度。但日常使用中稍不注意就会踩坑——从流动相选错导致离子源污染，到突然断样影响实验进度，再到调谐失败找不到原因，很多使用者都曾被这些问题困扰。本文结合实操经验，系统梳理LC-MS的日常运维规范、常见故障解决方案及关键技术细节，帮你避开雷区、高效用仪。
LC-MS的稳定运行，核心在“日常养护”而非“事后维修”。以下8个核心运维要点，是避免仪器出问题的关键：
• 必须接UPS稳压电源，停电时可避免分子涡轮泵因突然断电受损（涡轮泵真空悬浮状态下骤停，磨损会翻倍）。
• 实验室温度控制在20-25℃ ，湿度≤60%——湿度过高易导致电路板受潮，温度波动会影响色谱柱保留时间和离子化效率。
• 绝对禁用不挥发性盐（如磷酸盐、柠檬酸盐），盐分进入离子源会沉积在锥孔和毛细管内，轻则灵敏度下降，重则堵塞管路；需缓冲盐时，仅用乙酸铵、甲酸铵（浓度≤20mmol/L）。
• 流动相需现配现用，避免过夜——水相易长菌、有机相易挥发，含酸流动相（如0.1%甲酸水）放置超12小时可能导致基线漂移。
• 正离子模式加甲酸/乙酸（避免三氟乙酸），负离子模式加氨水；需提升负离子响应时，可加少量异丙醇（实操验证有效）。
• ESI源：每周用异丙醇冲洗雾化室，开震气阀震气1次；APCI源需每天震气，高温下更易积碳。
• 采样锥孔每2周清洗1次：拆锥孔后，用甲醇:水:甲酸=45:45:10 超声10分钟，再用超纯水、甲醇各超声10分钟，晾干后安装（避免手碰锥孔表面，防止指纹污染）。
• 流速控制：ESI源≤0.5mL/min，APCI源≤1.0mL/min——流速过高会导致雾化不彻底，溶剂残留污染离子源。
• 机械泵每6-12个月换油1次，换油前需放空真空，油位需在刻度线之间（油太少导致真空度不足，油太多易溢入涡轮泵）。
• 长期不用仪器（超1周）建议彻底关机；短期间隔（1-3天）保持真空状态更优——频繁开关机易加剧涡轮泵磨损。
• 实验后立即清洗进样针、进样阀，测过含酸或盐的样品后，需用甲醇/水（1:1）冲洗3次以上。
• 样品必须过0.22μm滤膜，防止颗粒物堵塞进样针或色谱柱；含蛋白样品需先经甲醇沉淀处理，避免蛋白在离子源结块。
• 用过含酸的流动相后，需用10%甲醇水冲洗色谱柱30分钟，再用纯甲醇封存——酸残留会腐蚀色谱柱填料，还可能进入离子源。
• 善用柱后切换阀：将分析初期（1-2分钟，多为溶剂峰、盐类）和末期（强保留杂质）的流动相切入废液，只让目标峰进入质谱，大幅减少离子源污染。
• 开机后、检测前必须调谐：用仪器配套调谐液（如Waters用碘化钠铯溶液，AB用PPG溶液）校正质量轴，确保目标离子质荷比偏差≤0.1Da。
• 调谐时总离子流（TIC）呈“折线型”而非平稳直线，先查注射泵是否有气泡（调谐液未进入质谱），再看喷雾针是否折弯——针尖歪了会导致雾化不均，需更换新针。
• 易损件提前备库存：如喷雾针、采样锥、机械泵油、在线过滤器滤芯，避免突发损坏时“停工等件”。
遇到仪器故障别慌，按“查故障列表→找关键原因→分步解决”的逻辑处理，以下是5类最常见故障的实操方案：
• 先看工作站故障提示：不同厂家（如Waters、Agilent）的故障列表会明确原因，优先从提示入手。
1. 气源问题：液氮罐液位低于1/3需换罐；氮气发生器压力需达0.6-0.8MPa，常见问题是空压机皮带断裂（换皮带后恢复正常）。
2. 进样问题：样品瓶位编辑错误（选了“空瓶位”）、室温过高导致进样臂马达过热停机（开空调降温后重启）。
3. 系统压力问题：压力过高（查进样针、泵头是否堵塞，用50%甲醇水反冲）；压力过低（看管路接口是否漏液，尤其是色谱柱两端和进样阀）。
4. 通讯问题：网线松动或IP地址不在同一网段，重新插拔网线，将电脑IP与仪器IP设为“192.168.100.X”同一网段（用“ping 仪器IP”命令检测，丢包率为0说明通讯正常）。
• 紫外也无峰→先查液相（如进样针堵塞、流动相耗尽）。
1. 离子源污染：拆采样锥看是否有白色盐渍或黑色积碳，按前文方法清洗；雾化室用异丙醇擦拭，毛细管用棉签蘸甲醇擦净。
2. 喷雾状态：打开离子源照明灯，正常应是“均匀雾状”；若呈“水滴状滴落”，调整喷雾针位置（上下移动2mm）或提高雾化气压力（0.3-0.5MPa）。
3. 调谐参数：是否用错调谐液（如ESI调谐液测APCI源），或毛细管电压偏离最优值（正离子3-5kV，负离子2-4kV）。
• 基线高多是“外部污染”而非仪器故障，按3步排查：
1. 流动相纯度：换Merck等品牌甲醇/乙腈，水用娃哈哈纯净水（实操亲测性价比高）——劣质溶剂中的杂质会在离子源电离，产生杂峰。
2. 离子源残留：刚测过高浓度样品（如100μg/mL以上），用纯甲醇冲洗离子源30分钟，再测空白溶剂看基线。
3. 离子宽度设置：选择反应扫描（SRM）时，离子宽度别设太宽（通常0.7-1.0Da），宽了会纳入更多噪音；选择离子扫描（SIM）时基线更低。
1. 确认开机顺序正确：先开机械泵→等真空度达标（通常<1×10⁻⁵ mbar）→开质谱主机→开工作站（顺序反了易导致通讯失败）。
2. 查硬件连接：网线是否插紧（主机和电脑两端都要查），Hub端口指示灯是否亮（不亮则换Hub接口）。
3. 改IP地址：将电脑IP设为与仪器同一网段（如仪器IP是192.168.100.37，电脑设为192.168.100.38），重启软件后重试。
• 调谐时总离子流呈“折线”、无校正液离子峰，多是2个小问题：
1. 注射泵有气泡：拆下注射泵玻璃筒，排空气泡后重新安装（注意针柄卡在卡槽里，避免推液不均匀）。
2. 喷雾针折弯：ESI针针尖极细（直径0.1mm），多次拆装易折弯，导致喷雾不均——用手电筒照离子源，针尖歪了需更换新针。
除了运维和故障解决，以下3个技术细节，直接影响数据准确性和实验效率：
1. 液相方法转LC-MS：
别直接“照搬”，3点必须改
从HPLC方法转到LC-MS，不能直接套用，重点调整3个参数：
• 流动相换“质谱友好型”：用乙酸铵替代磷酸盐，用甲酸/乙酸调pH（正离子pH<6，负离子pH>8），避免三乙胺（会产生强102Da杂峰，污染离子源）。
• 流速降下来：HPLC常用1.0mL/min，LC-MS中ESI源≤0.5mL/min，APCI源≤1.0mL/min（流速太高会导致溶剂无法完全脱附）。
• 梯度平衡要够：梯度结束后，需保持初始比例10-15分钟（如从95%乙腈回落到5%乙腈），确保色谱柱和离子源恢复平衡，避免下次进样保留时间漂移。
LC-MS定量常用内标法，能抵消基质效应和离子化效率波动，选择内标有讲究：
• 首选目标物的氘代物（如测甲醇用CD₃OH），理化性质几乎一致，校正效果最好。
• 若无氘代物，需满足4个条件：①样品中不含该物质；②与目标物极性、保留时间相近；③性质稳定（不与样品反应）；④质谱响应好（信噪比≥10）。
• 别“硬凑”内标：若找不到合适内标，且目标物响应稳定、前处理回收率>85%，用外标法也可行（实操经验）。
3. 离子源参数优化：
看目标选“模式”，调电压出“好谱”
• 离子源选择：ESI源适合极性、离子型化合物（如生物碱、有机酸），APCI源适合弱极性、热稳定化合物（如甾体类）；测未知样品可试“ESCI复合源”，一次获取ESI±、APCI±四种模式数据。
• 锥孔电压：想测分子离子峰（如[M+H]⁺）用低电压（20-30V）；想获取碎片信息（做二级质谱）调高电压（50-80V）——例如测某药物，25V时能看到清晰[M+H]⁺峰（m/z 325），50V时出现特征碎片峰（m/z 74、115）。
• 脱溶剂气：ESI源脱溶剂气温度300-350℃，流量800-1000L/h；APCI源需高温气化，温度400-450℃，流量1200-1500L/h。
四、总结：LC-MS是“实验科学”，多观察、勤记录
液质联用仪的核心是“人仪配合”——日常多观察仪器状态（如真空度、喷雾情况、基线波动），实验后及时记录（如流动相批次、调谐结果、故障处理过程），慢慢就能摸清仪器“脾气”。
遇到问题别慌，先按“查故障提示→分模块排查→分步解决”的逻辑来，90%的故障都能通过基础操作解决，没必要动辄找工程师。记住：对LC-MS来说，“预防式养护”永远比“补救式维修”更高效——守住运维红线，正确处理小故障，仪器才能成为你实验中的“靠谱搭档”。
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