微生物不生长原因

张明 2025-10-28

微生物不生长原因

培养基问题（最常见的原因之一）

成分错误或缺失

配制时称量错误，漏加某种关键成分（如碳源、氮源、生长因子）。

使用了不合适的培养基，该菌种有特殊的营养要求（如需要添加血液、血清、特定维生素或氨基酸）。

pH值不当

培养基灭菌前后的pH值发生变化未校正。

菌种生长所需的最适pH范围很窄，当前pH不适合。

培养基配制后存放过久，吸收CO₂导致pH下降。

选择性过强/含有抑制剂

如果使用的是选择性培养基，其中的抗生素或其他抑制剂浓度过高，或者混匀不均，导致局部浓度过高抑制生长。

抑制剂失效（如抗生素过期）导致杂菌过度生长，抑制了目标菌。

凝固剂问题

琼脂浓度过高，影响营养扩散和菌种生长。

琼脂本身含有抑制物（较少见）

灭菌不当

过度灭菌：高温高压时间过长，导致培养基成分被破坏（如糖类焦化、维生素分解、琼脂降解）。

灭菌不彻底：培养基含有耐热杂菌，与目标菌竞争营养或产生毒素。

培养环境问题

温度不适宜

培养箱温度不准、不稳定或温度分布不均。

不了解菌种的最适生长温度（如嗜冷菌、嗜热菌、中温菌）。

气体条件不符

需氧菌：培养容器密封过严，或接种物埋得过深，导致缺氧。

厌氧菌：厌氧环境创建失败（如厌氧罐/袋漏气、催化剂失效、厌氧指示剂未达标）。

微需氧菌/苛养菌：未提供特定的气体环境（如5-10% CO₂，如弯曲杆菌、脑膜炎球菌）。

CO₂培养箱： CO₂浓度设置错误或传感器校准失效。

湿度不足

培养箱内湿度太低，导致培养基（尤其是平板）干燥，影响菌体水分吸收。

操作技术问题

接种物问题

接种量不足：挑取的菌苔或菌落太少。

接种物状态不佳：使用了过于衰老的菌液或处于稳定期/衰亡期的菌种。

冻干菌种或冷冻菌种复苏不当：未进行充分复苏或传代，直接接种到固体培养基上。

接种过程损伤

接种针温度过高，烫死了菌种。

在热接种区域操作时，热辐射导致菌种死亡。

培养时间不足

有些菌种生长非常缓慢（如某些放线菌、真菌），需要培养数天甚至数周，观察时间过短。

污染

菌种被其他快速生长的微生物（如霉菌、细菌）完全覆盖，无法观察到目标菌落。

菌种保存与复苏问题

保藏不当

反复冻融或保存温度不稳定（如-20℃冰箱开关频繁）。

甘油管保存时，甘油浓度不当或未充分混匀。

菌种保藏时间过长，活力下降。

复苏流程错误

从超低温（-80℃）或液氮中取出后，未在合适温度（如37-40℃水浴）快速复苏。

复苏后直接划板，而未先接种在液体培养基中富集。

检测与观察方法问题

观察方法不当

菌落非常微小、透明或嵌入琼脂内部，肉眼难以观察，需要借助解剖镜或进行染色镜检。

某些菌种在固体培养基上就是不长成典型菌落，而是形成一层薄膜或扩散生长。

染色或镜检错误

染色液失效或操作不当，导致假阴性。

镜检时未找到菌体。

系统排查建议

当遇到菌种长不出的情况时，建议按照以下步骤进行排查：

设立阳性对照：使用一种已知的、生长良好的类似菌种，在相同培养基和条件下同时培养。如果对照能生长，则问题出在目标菌种本身或其接种物上；如果对照也不长，则问题出在培养基、环境或通用操作上。

镜检确认：对接种物进行染色镜检，确认是否有活菌存在。

多媒介培养：同时使用营养更丰富的培养基（如血平板）和通用培养基进行培养，看是否因营养苛求所致。

检查设备：校准培养箱的温度和CO₂浓度，检查厌氧罐的气密性。

回顾操作：仔细检查从培养基配制、灭菌、接种到培养的每一个步骤，确认是否有偏离标准操作程序的地方。

内容来源：微生物菌种网

责任编辑：展源

审　　核：何发

微生物不生长原因

评论

热点文章