答：SDA不是选择性培养基，而是一种广谱的增菌培养基，pH范围5.4-5.8，某些细菌是可以在SDA上生长的，霉菌和酵母菌总数计数时SDA上生长的菌均应计入霉菌和酵母菌总数；或者可以经过评估选择含有抗生素（如氯霉素）的SDA或者玫瑰红钠琼脂培养基进行霉菌和酵母菌总数计数。

答：在进行微生物培养时，若正置培养，琼脂培养基中的水分易蒸发使平板干裂，不利于微生物的生长；同时水蒸汽会在平皿盖上形成冷凝水，若回落在培养基表面，会使菌落蔓延生长，无法计数，若冷凝水太多会使培养基与平皿分离，容易滑动倒置培养可减少培养基表面的空气流动，减慢培养基中水分蒸发的速度，充分维持弹性，有利于菌株的生长和繁殖，防止空气中杂菌对培养基及培养物造成污染；也会由于重力作用在一定程度上使营养物质沉积到培养基表面，有利于微生物利用营养物质；倒置的平板方便拿取，避免环境中杂菌的污染。中国药典2015版1105中关于平皿法（倾注法）有明确要求。

需要注意的是，《食品安全国家标准 食品微生物学检验霉菌和酵母计数》（GB4789.15-2016）是要求正置培养，而非倒置，以防霉菌孢子形成次生菌落，影响计数结果。

答：微生物限度检查中霉菌和酵母菌培养时间5-7天，因不同的霉菌酵母菌生长特性不同，所以具体培养时间，由企业根据各自情况（基于风险评估）自行确定。

答：但是在实际操作中，我们会发现如果样品中存在霉菌，培养到第5-7天时，可能菌落之间已经融合，并蔓延生长至整个平皿，此时的霉菌已经无法计数。建议霉菌和酵母菌检测时，第三天计一次数，培养结束时计一次数，比较两组数据，以多者为最终结果。

霉菌和酵母菌检测培养过程中，避免频繁取拿观察，尽量避免振动等，防止孢子扩散。

答：关于环境检测，2015版《中国药典》的9205和GB/T16294-2010《医药工业洁净室(区)悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法》都有规定，且一些细节略有差别。其中国标的规定更为具体，建议实际操作中以国标为准，药典可以做为参考。

 答：开瓶后的培养基，如果长时间不使用，还在效期内，建议开瓶后间隔1年进行复验。如果出现结块，则不能使用。同理，如果同一批次一次购买量较多，一年内未使用完，也建议进行复检。

答：出现这个现象，可能的原因（常见）包括以下三个方面：

（1）滤杯：无论是一次性的滤杯还是反复灭菌的滤杯，理论上都是无菌的，但是不排除滤杯灭菌不彻底和使用时操作人员与滤杯底部接触，污染滤杯的可能。

（2）微限仪的滤头：微限仪滤头如果在更换滤膜的过程中灭菌不彻底，上一个样品可能会污染下一批滤膜，如果微限仪长时间不灭菌，或使用的滤膜破损，都可能使微限仪内部管道带菌，在泵开启的瞬间形成气溶胶，污染滤头。

（3）转移过程中被污染：在滤膜由滤头转移至平皿的过程中，镊子灭菌不彻底，操作者手不稳使滤膜和仪器，台面，平皿，身体发生过接触。

具体问题具体分析，如果出现这样的问题，需要根据实验室的实际情况具体分析。

答：培养基指示特性包括菌落大小、形态特征、指示剂反应情况（菌落颜色变化）等。例如大肠埃希氏菌在麦康凯琼脂培养基上桃红色菌落有沉淀环、乙型副伤寒沙门菌在XLD有黑心等。

答：在2015版《中国药典》无菌检查法通则1101中，并没有强制规定灵敏度检查需要使用对照培养基，所以不使用对照培养基也是可以的。但是国家有FTM和TSB的对照培养基，建议在做FTM和TSB的培养基适用性时，使用对照培养基进行参比。

答：（1）使用用硫乙醇酸盐流体培养基，在培养16-18小时这个时间进行观察，计数，计数前不要摇晃，培养时间太长，培养基将浑浊，点计不清；

（2） 使用哥伦比亚琼脂培养基，浇注或涂布后，置厌氧罐（袋）里，再置培养箱培养，计数。

答：我国是抗生素及注射剂生产使用大国，铜绿假单胞菌为假单胞菌属菌种，对很多抗生素都天然耐药，药物敏感度不高，不适合做方法适用性。但假单胞菌属的细菌对培养体系的营养要求高，所以适合做培养基适用性检查。

答：不可接受微生物通常是指那些已知有明显致病性的，存在足够的数量，通过产品的给药途径可能导致患者不可接受风险的微生物。如何确定一种微生物是不可接受的，需要进行风险分析，包括微生物负载量、微生物特性、产品特性、给药途径、对患者潜在影响等。

答：可以。厂家产品说明书提供的灭菌参数可作为参考使用，使用单位也可以根据自己实验室的实际情况，在相关法规要求内，使用自己验证过的灭菌参数来执行。

【法规来源：中国药典2015版9203药品微生物实验室质量管理指导原则   ……培养基灭菌应按照生产商提供或使用者验证的参数进行……】

答：草酸钾兔血浆用于溶血性链球菌链激酶试验，致病性乙型溶血性链球菌能产生链激酶(即溶纤维蛋白酶)，此酶能激活正常人体血液中的血浆蛋白酶原，使生成血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。此实验乙型溶血性链球菌阳性，金黄色葡萄球菌阴性。

兔血浆用于金黄色葡萄球菌的血浆凝固酶试验。细菌生成血浆凝固酶后释放于血浆中，称为游离凝固酶，不直接作用到血浆纤维蛋白原上，而是被血浆中的致活剂（即凝固酶致活因子）激活后变成耐热的凝固酶样物质，此物质纤维蛋白原变为固态纤维蛋白，血浆因而凝固。致病性葡萄球菌能产生凝固酶，例金黄色葡萄球菌阳性，表皮葡萄球菌阴性。

答：（1）最好挑选18-24h的菌落进行革兰氏染色,培养时间过久的的革兰氏阳性细菌可能会被染成红色而造成假阴性。

（2）挑取适量的菌，不宜过多,均匀涂开。

（3）乙醇脱色是革兰氏染色是否成功的关键,15-30s为宜，脱色不够可能会造成假阳性,脱色过度可能会造成假阴性。

答：根据实验需求，摆放斜面一般有三种形式：

（1）长斜面：斜面底部刚覆盖试管底部，上部距管口2.5-3cm左右；例如TSA传代斜面。

（2）高层斜面：斜面与底层高度约为2:3，即底部高约3cm，斜面长度约2cm；如三糖铁高层斜面。

（3）普通斜面：斜面底部距试管底部约1cm，上部距管口约2.5-3cm。

答：该培养基含有乳糖、蔗糖和葡萄糖的比例为10:10:1，只能利用葡萄糖的细菌，分解葡萄糖产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面后来又变红，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，所以仍保持黄色。而发酵乳糖的细菌则产生大量的酸，使整个培养基呈现黄色。如菌种接至培养基培养后产生黑色沉淀，是因为某些细菌能分解含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢和培养基中的铁盐反应，生成黑色的硫化亚铁沉淀。

答：不能。某些非沙门菌也能在三糖铁上呈现和沙门菌一样的颜色变化，例如奇异变形杆菌。如三糖铁上有上述颜色变化，需要进一步的进行适宜的鉴定试验，确证是否为沙门菌。

如果采用传统的生化鉴定，可参考GB 4789.4-2016中沙门氏菌检验的方法。

答：挑选疑似菌分离、纯化。

（1）革兰氏染色：革兰氏阴性无芽孢杆菌；

（2）乳糖发酵试验：产酸产气或产酸不产气；

（3）IMVIC试验结果：++--或-+--；

     判定检出大肠埃希氏菌。

答：作为碳源补充，有利于绿脓菌素的生成。