样品制备

一切从样品开始，俗话说"糟糕的样本制备导致糟糕的数据"。样品和流动相过滤是一种简单而经济的维护方法，有助于延长易损件的使用寿命，减少系统的磨损。一般来说，用 0.45 或 0.2 μm 过滤器过滤样品就足以去除微粒。

如果样品不易通过这些过滤器，可尝试使用 0.8 μm 过滤器。较大的过滤器孔径对含有可见颗粒的蛋白质非常有效。请务必选择蛋白质结合率低的滤膜，如聚偏氟乙烯（PVDF）或聚醚砜（PES），因为尼龙滤膜通常会结合蛋白质，导致；回收率下降。

缓冲液制备

要保持系统平稳运行，最简单的工作之一就是保持缓冲液和溶剂中没有微粒。最糟糕的事情莫过于在运行过程中发生了一些您本可以避免的事情--比如由于缓冲液不干净而导致色谱柱或管路堵塞。与在系统上运行样品前过滤样品类似，过滤缓冲液和溶剂也有助于防止系统堵塞。请尝试以下几种缓冲液制备技巧，以帮助维护您的系统。

• 使用 HPLC 级材料和水制作缓冲液。这将有助于减少缓冲液中不必要的微粒。
• 缓冲液配制完成后要进行过滤。虽然缓冲液的化学成分可能是纯净的，但在制备缓冲液时可能会出现灰尘、瓶盖上的颗粒物或盐类沉淀。为获得最佳效果，请在使用前使用 0.5 µm 过滤器。
• 对缓冲液进行脱气处理。在系统使用缓冲液前对其进行脱气和/或真空过滤，可最大程度地减少流动相中的空气和微粒。
• 偶尔检查缓冲液瓶/袋是否有细菌生长的迹象。摇晃或搅拌后出现浑浊的溶液应丢弃。用 0.02% 叠氮化钠等抑菌剂处理可延长溶液的保存时间。为达到最佳效果，请根据需要配制新鲜溶液。
• 为丢弃未使用的缓冲液设定有效期。虽然您可以获得更长的稳定性，但许多实验室规定稀释缓冲液的有效期为一周。

色谱柱维护

色谱柱价格昂贵，与实验室中的任何投资一样，在处理、使用和储存色谱柱时都应小心谨慎。只要遵循以下简单提示，就能确保延长色谱柱的使用寿命。

• 适当时使用色谱柱保护装置。在进样阀和色谱柱之间使用在线柱前过滤器或保护器（20 μm）是延长色谱柱使用寿命的有效方法。
• 更换手动填料色谱柱中磨损的熔块和 O 形环，这样一个小配件就可能导致重要实验失败。
• 正确储存色谱柱。细菌在缓冲液的中性环境中大量繁殖。将高效液相色谱级水流过色谱柱，然后将色谱柱置于抑菌溶液（如含有 20% 乙醇的溶液）中，并置于 4℃ 至 8℃ 的冰箱中，直至准备再次使用，这样可以防止细菌滋生。

管路维护

在为您的应用选择管路时，需要考虑几个因素。如果使用和维护正确的管路，系统的这一部分将可以持续运行很长时间。

• 使用与流动相化学相容的最佳材料。聚醚醚酮 (PEEK) 聚合物管材可承受大多数操作条件，通常用于系统的高压区域。在系统中蛋白质浓度较高的部分，如进样管路和出样管路，应使用聚四氟乙烯（PTFE）管。聚四氟乙烯管可防止蛋白质粘附，而且透明，能让您看到缓冲液并识别缓冲液管路中的气泡。
• 管路尺寸是另一个因素。在大多数情况下，您希望选择小直径的管路（通常为 0.15 至 0.75 毫米），以减少系统内的体积，但要注意小管路可能会增加背压。系统中的管路应足够短，以最大限度地减少死体积，但也应足够长，以提供元件定位的灵活性。
• 每天工作结束后用 HPLC 级水冲洗管路，清洗掉使用过的缓冲液，因为缓冲液会析出盐分并堵塞管路。在低温条件下工作时，这一点尤为重要，因为盐分会在低温下析出。

系统维护

您的硬件也需要定期维护。以下是维护系统的其他一般提示。

• 定期用 1N NaOH 溶液清洗样品入口管路和回路，然后再用 HPLC 级水或中和缓冲液清洗，以消除管路中的样品积聚。
• 每周用新鲜的 20% 乙醇或异丙醇更换活塞清洗液。至少要定期检查液面是否耗尽或细菌生长，并根据需要更换或补充。
• 定期更换经常与样品接触的 PEEK 管，尤其是与馏分收集器相连的管路。管路表面会接触到大量富含蛋白质的溶液，这些溶液会开始结块并最终堵塞管路。
• 不使用时，将所有系统管路保存在新鲜的 20% 乙醇中，以避免细菌滋生。
• 定期检查系统管路是否有裂缝和弯曲。管道弯曲会限制流量并增加系统背压。
• 为获得最佳效果，偶尔用 1 N NaOH 对整个系统进行消毒，以清理从泵到馏分收集器的流路。

现代色谱系统采用自动流程，为系统运行用户定义的清洁方法。这样，用户就可以方便有效地冲洗系统，为后续运行做好准备。利用这些技巧制定例行维护计划，可使您的色谱系统在未来数年内保持正常运行。