微生物平板计数法和血球计数板操作避坑指南！

张明 2025-04-28

一、两种方法的本质差异

‌二、平板计数法操作避坑指南

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‌1. 菌落重叠 ‌

原因‌：涂布不均匀或稀释度不足（未达到30-300菌落/平板）。

‌避坑‌：

梯度稀释至少做5个梯度（如10²~10⁶），选择2~3个合适稀释度的平板计数。

涂布时用无菌涂布棒从高浓度向低浓度操作，避免交叉污染。

‌2. 隐形菌落‌

‌现象‌：微小菌落、扩散菌落（如枯草芽孢杆菌）难以肉眼识别。

‌避坑‌：

培养后立即观察（避免菌落干燥收缩）。

对扩散性菌落使用“分区计数法”，仅计算独立菌落中心区域。

‌3. 培养基的问题‌

问题‌：凝固不匀或表面冷凝水导致菌落蔓延。

避坑‌：

倒平板前确保培养基冷却至50℃左右（手握不烫）。

倒置培养平板，避免冷凝水流入。

‌三、血球计数板法操作避坑指南

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‌1. 细胞分布‌

‌问题‌：细胞聚集在计数室边缘或同一方格内。

‌避坑‌：

菌液混匀后静置1分钟再取样，减少气泡干扰。

计数时遵循“计上不计下，计左不计右”原则（避免重复计数）。

‌2. 显微镜的“视觉欺骗”‌

现象‌：杂质颗粒、气泡被误认为细胞。

‌避坑‌：

用亚甲基蓝染色区分死/活酵母（活细胞拒染，死细胞蓝色）。

调整显微镜光圈和焦距，观察细胞立体结构（杂质通常扁平）。

‌3. 计算公式的易错点‌

公式‌：细胞数/mL = 平均每格细胞数 × 稀释倍数 × 10⁴

易错点‌：

忽略计数室体积（0.1mm³）与单位换算（1mL=10³mm³）。

未校正稀释倍数（如原液已稀释10倍）。

‌四、两种方法的“致命翻车场景”对照表

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