Part 1  扩增曲线

扩增曲线是一种以循环数为横坐标，以反应过程中荧光信号强度为纵坐标的，描述PCR进程的曲线。扩增曲线包括基线期、指数期、线性期、平台期。

正常的扩增曲线，整体呈光滑的S型，基线期平整，指数期明显且陡度较大，线性期逐渐趋于平整，平台期基本平整。Ct值一般在20-30之间，且复孔间的曲线重复性好。

1. Ct值出现过晚（Ct值＞30)

可能原因及建议：

1）模板稀释过度；建议减少模板量稀释倍数，提高模板浓度。

2）基因表达丰度较低；建议选择灵敏度高的qPCR试剂盒。

3）模板降解；建议重新制备模板。

4）扩增效率低；建议优化退火温度，排查是否有PCR反应抑制剂。

2. 扩增曲线抖动，不光滑

可能原因及建议：

1）仪器长时间未校准，在检测中出现了波动；建议定期校准仪器。

2）模板不纯；建议增大模板稀释倍数或者重新制备较高纯度的模板。

3. 重复性差                 

可能原因及建议：

1）样本重复性差；建议保证样品部位、处理条件的一致性，提取核酸后检查样品的完整性和纯度。

2）技术重复性差；建议规范操作，尽量减少操作误差，如定期校准加样器，配制预混合液，反应前混匀样品并离心，去除气泡等。

Part 2  溶解曲线

熔解曲线是以反应温度为横坐标，以荧光信号负一次导数（dR/dT）为纵坐标，反映温度与DNA双链解链程度变化的曲线。

熔解曲线是染料法qPCR中检测是否具有非特异性扩增的重要指标。正常的溶解曲线有一个平滑尖锐的单峰，NTC对照不起峰。

1. 样品组存在双峰，NTC对照组起峰

可能原因及建议：

1）NTC对照组起峰，此时样品组的双峰可能由引物二聚体造成；可通过提高退火温度、降低引物浓度、提高模板浓度等方法改善引物二聚体，必要时重新设计引物。

2. 样品组存在双峰，NTC对照组不起峰

可能原因及建议：

1）引物对于目的基因的特异性不强，出现非特异性扩增；可重新设计引物。