已蔓延平板的计数方法

张明 2026-02-05

微生物平板蔓延可能导致菌落难以区分，影响计数准确性。以下是处理方法和计数策略：

预防措施（减少蔓延发生）‌

添加抑制剂‌：在培养基中加入0.001%氯化三苯基四氮唑（TTC）或0.1%脱氧胆酸钠，抑制细菌运动性，使菌落显色（如红色）便于观察。

‌调整琼脂浓度‌：增加琼脂浓度至1.5%-2.0%，提高培养基硬度，限制微生物扩散。

‌优化涂布方法‌：

涂布前确保平板表面干燥（静置10-15分钟）。

控制接种量，避免过载（通常稀释样品至30-300 CFU/平板）。

采用“双层琼脂法”：先铺一层薄琼脂，凝固后再接种并覆盖第二层。

‌缩短培养时间‌：在菌落刚形成时（如18-24小时）及时观察，避免过度生长。

已蔓延平板的计数方法‌

‌分区计数法‌：

将平板划分为若干区域（如4-8个扇形区），统计各区域清晰可辨的菌落数，取平均值后乘以分区数。

仅计数蔓延边缘以外的独立菌落。

‌标记追溯法‌：

用记号笔在平板底部标记蔓延区域的边界，统计未被覆盖的独立菌落。

‌估算与报告‌：

若蔓延面积＜50%，可计数未蔓延区域的菌落并推算总量（注明估算方法）。

若蔓延严重，记录为“蔓延生长”（Spreading Growth, SG）或“无法计数”（Too Confluent, TC）。

‌图像分析软件‌：

使用菌落计数仪或图像处理软件（如ImageJ、OpenCFU）识别边缘清晰的菌落。

特殊微生物的处理‌

运动性细菌（如变形杆菌）‌：

使用含胆盐的培养基（如MacConkey Agar）抑制运动。

降低培养温度至25-30℃（部分细菌运动性减弱）。

‌真菌或放线菌‌：

添加抗生素（如放线菌酮）抑制污染菌，或使用低营养培养基减缓生长速度。

数据记录与报告‌

明确标注‌：在实验记录中注明“平板蔓延”，说明处理方式（如“仅计数未蔓延区域”）。

‌稀释重复‌：若多个稀释度均出现蔓延，选择可计数的最高稀释度结果，并结合其他稀释度数据综合判断。

‌验证实验‌：重新优化条件（如更低稀释度、添加抑制剂）后重复实验。

参考标准‌

国际标准‌：

ISO 4833-1:2013 建议：若蔓延面积＞平板面积的50%，数据无效。

USP <61>：允许报告“估计值”并注明蔓延情况。

示例记录‌

“10⁻⁶稀释度平板出现约70%面积蔓延，未蔓延区域计数为45 CFU，估算总量为150 CFU（方法：按面积比例换算）。”

“10⁻⁵稀释度平板完全蔓延，标记为TC，实验重复中10⁻⁶稀释度结果为82 CFU。”

内容来源：网络

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