如何避免头发样品制备中的交叉污染
挥发性样品的制备--避免头发样品制备中的交叉污染
图1. 头发是毒品滥用分析中的常用样品。
头发常被用作毒品分析的样品材料，其检验结果可用于司法程序，因此必须尽可能准确无误。本文介绍的对交叉污染的研究，有助于验证挥发性样品的制备。
头发分析可以在许多法医和临床应用中帮助调查毒品吸食情况，协助判断长期嗜酒病史，亦可用于因吸毒致死的法医调查、吸毒犯罪调查或疾病保险扫描调查。
毒品及其代谢产物可封存在毛发中，对此类残留物的分析可追溯较长一段时间内（通常为取样前数月）的毒品吸食情况，并能提供准确的判断依据，该分析所提供的信息要优于现场取样（如对吸毒者血样和尿样的检测）。血样和尿样检测的局限性在于必须及时对吸毒嫌疑人采样，而与之相反，头发分析则可于数周之后采样。
在血液循环中，毒品及其代谢物循环进入皮下毛囊。含有毒品代谢物的片段会随头发一起生长，可能需要经历数月之久，才能采集到的适当的样品，明确调查的时间范围，之后才可能调查出嫌疑人在何时吸食毒品及吸食的种类，并据此提供其属于常规、急性或孤立性吸毒事件的证明。
正确配置仪器
法医分析实验室引入新的测试装配或仪器时，必须预先评估以确证样品或试管不存在影响分析结果的人为污染。本文介绍的离心式真空蒸发仪Genevac EZ-2，可容纳多个样品，为实验室提供了较高的样品流通量。蒸发性样品浓度技术的关键是防止交叉污染并获得样品回收率，尤其是以pg数量级（10-12g）存在的易挥发性溶质更是如此。作为对新仪器评估的一部分，Roar Forensics 公司在正式使用前就对EZ-2进行了检验，同时采用毛发中的酒精标记物以及毒品滥用标记溶液（DoA），对可能存在的交叉污染进行检验，并采用具挥发性的安菲他明进行回收率评估。
图2. 应用EZ-2进行交叉污染研究。
交叉污染研究
交叉污染研究目的是为了确定在头发分析实验室中，应用EZ-2蒸发头发中酒精标记物和DoA时，蒸发过程中是否会出现高浓度交叉污染。
测试在96孔微滴定板上进行，样品在该微滴板上在总是横向迁移。不含分析溶质的“空白”试管在样品台上沿样品的序列排放：有的与样品相邻，也有几个离样品较远，安放于Genevac 10-5002样品架上的试管（见图3）直径为13mm，高度为100mm。
实验步骤：
将1500pg的毛发酒精标记物——乙基葡萄糖醛酸苷（EtG）溶解于2ml由甲醇、甲酸混合而成的固相萃取淋洗剂（SPE）中。在40℃条件下，采用 “低沸点”法蒸发EZ-2中两个相同的样品架。
将1000ng的DoA标准化溶液溶于7 ml由丙酮、二氯甲烷、乙基乙酸酯和氨水组成的SPE淋洗剂中。在40℃条件下，采用 “低沸点混合物”法蒸发EZ-2中两个相同的样品架。
该DoA标准化溶液含有：芽子碱甲基酯、可卡因、苯甲酰基芽子碱、原可卡因、乙基苯酰芽子碱、吗啡、6-单乙酰基吗啡、可待因、二羟基可待因、美沙酮、聚对苯二甲酸乙二酯、苯（异）丙胺、甲基苯（异）丙胺、丙二醛、亚甲基双氧甲基苯丙胺（摇头丸）、N-甲基二乙醇胺以及N-甲基-1-（3,4-亚甲二氧基苯基）-2-丁胺。
选择分析溶质浓度的原则是让每种方法均能产生最高的头发校准因子：对EtG 50pg/mg当量及DoA 50pg/mg当量。蒸发后再用100μl流动相处理每只试管，并进行LC-MS-MS分析。
图3. 检测时放置试管的位置（SS=样品试管；B=不含分析溶质的“空白”试管）。
交叉污染研究实验结果表明：在分析位于P1、P4、P12、P17、P19、P21、P23、P24、P28、P36和P40的试管内含物质时，未发现EtG和DoA。位置P20表明：预期的分析溶质为1500pg EtG和1000ng的DoA。
分析溶质回收研究
为便于评估，本实验选用浓度为0.2ng/mg（头发检测协会规定的的安菲他明毒瘾标志的极限值）的挥发性安菲他明。用移液器向13x100mm试管中加入含4ng溶质的甲醇溶液，在40℃下，依照“低沸点化合物”法蒸发EZ-2中的3只试管，同时在室温下应用抽风系统蒸发3只试管。蒸发完成后，各向试管中加入100μl流动相，再进行LC-MS-MS分析。将两种蒸发条件下所得到的安菲他明峰值范围进行比对，计算回收率。结果显示：在EZ-2中蒸发的试管中安菲他明的回收率是室温下蒸发结果的1.15倍。
小结
在选定的蒸发条件下，对EtG或DoA的浓度测试中没有发现交叉污染的情况。就现有数据来看，该装置适用于蒸发含安菲他明的SPE，且没有观察到损失情况。该结果表明：Genevac–DoA蒸发程序为高挥发性的安菲他明提供了优异的回收率，含安菲他明的样品可在0.2ng/mg的边界值水平上进行测定。
交叉污染研究
由于分析结果可在司法诉讼程序中应用，因此方法的正确性和有效性极其重要，尤其要避免样品制备过程中人为因素带来的交叉污染。其研究重点是尽可能接近实际给定浓度并采用相应物质。
马尔文公司 Genevac公司
展源
何发
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