黄曲霉素(Aflatoxins)
黄曲霉素存在于花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中。霉菌的生长并不一定表明黄曲毒素的存在，因为黄曲毒素只有在湿度、温度适合及通风良好才会生成。黄曲霉素B类具有蓝色荧光，G类具有绿色荧光。除了蔬菜中常见的(B1,B2,G1,G2)，还有存在喂食了有毒饲料的奶牛的牛奶中的黄曲霉素M，其中毒性最高的M的代谢物为4-羟基化的产物Bs.
1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为1类致癌物，是一种毒性极强的剧毒物质。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。在天然污染的食品中以黄曲霉毒素b1最为多见。其毒性和致癌性也最强。
1根据国标《GB/T 18979-2003》，使用柱后衍生方法可以在一次测定过程中，在同一荧光发射波长下同时检测出这六种黄曲霉素。(Pickering公司提供)
经过黄曲霉素免疫亲和柱净化，经过柱后后衍生荧光检测。
纯化回收率
| 基质 |
B1 |
B2 |
G1 |
G2 |
| 玉米（Alfa 10ppb，OTA 14.3ppb） |
107% |
91% |
103% |
75% |
| 大米（Alfa 10ppb，OTA 14.3ppb） |
107% |
93% |
98% |
85% |
| 麦芽（Alfa 10ppb，OTA 14.3ppb） |
98% |
99% |
97% |
70% |
| 葡萄干（Alfa 10ppb，OTA 14.3ppb） |
99% |
106% |
101% |
69% |
分析条件：
色谱柱：MYCOTOX柱，1612124。
温度：42℃
流速：1.0mL/min
流动相：MeOH,CH3CN,H2O; 22:22:56,
柱后衍生条件：
柱后衍生系统：Pinnacle PCX 1.4mL反应器
温度：95℃
试剂：I2 100mg/L 水溶液
检测：荧光检测，氙灯
激发波长：365nm 检测波长：430nm
仪器与耗材
| 货号 |
名称 |
品牌 |
规格 |
| 46300-U |
黄曲霉素混合标准品 |
Supleco |
溶于苯:乙腈(98:2) 1mL×5个 |
| 46323-U |
黄曲霉素B1标准品 |
Supleco |
3ug/ml, 溶于苯:乙腈(98:2) |
| 46324-U |
黄曲霉素B2标准品 |
Supleco |
3ug/ml, 溶于苯:乙腈(98:2) |
| 46325-U |
黄曲霉素G1标准品 |
Supleco |
3ug/ml, 溶于苯:乙腈(98:2) |
| 46326-U |
黄曲霉素G2标准品 |
Supleco |
3ug/ml, 溶于苯:乙腈(98:2) |
| 12058 |
黄曲霉素免疫亲和柱 |
Afla |
AflaCLEAN 样品前处理柱 分析黄曲霉素- 25 columns/box |
| 1827-00110 |
玻璃纤维滤纸 |
Whatman |
11cm孔径1.5um |
| 80665 |
液相进样针 |
Hamilton |
100ul |
| 1153-1032 |
柱后衍生系统 |
Pickering |
反应体积1.4mL |
| 1612124 |
MYCOTOX反相柱 |
Pickering |
C18，4.6×250 mm |
| 18ECG001 |
保护柱夹套 |
Pickering |
带3个保护柱 |
2. 根据国标《GB 5413.37—2010》食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定
(摘自Sigma-Alchrich 公司)
色谱柱：Ascentis Express C18, 2.7um, 2.1×100mm
柱压：230bar
流 速：0.3ml/min
柱 温：35℃
试液温度：20℃
进样量：10ul
流动相：A液，0.1%甲酸溶液; B液，乙腈-甲醇溶液(1+1)
| 时间(min) |
流动相A% |
流动相B% |
梯度变化曲线 |
| 0 |
68.0 |
32.0 |
|
| 4.25 |
55.0 |
45.0 |
线性 |
| 5.00 |
0.0 |
100.0 |
线性 |
| 5.70 |
0.0 |
100.0 |
即时 |
| 6.00 |
68.0 |
32.0 |
线性 |
仪器与耗材
| 货号 |
名称 |
品牌 |
规格 |
| 46319-U |
黄曲霉素M1标准品 |
Supleco |
10ug/ml, 溶于乙腈 |
| 12058 |
黄曲霉素免疫亲和柱 |
Afla |
AflaCLEAN 样品前处理柱 分析黄曲霉素- 25 columns/box |
| 53823-U |
Ascentis Express C18 |
Supleco |
2.7um, 2.1×100mm |
| AP-SE-12B |
固相萃取装置 |
Ameritech |
方形12孔 |
| AVP-7120 |
真空系统 |
Ameritech |
抽气速度:20L/min;真空度:200mbar |
| 532122N |
针式过滤器 |
Ameritech |
水系微孔滤膜13mm 0.22um 200个 |
3 高效光化学反应法测定黄曲霉素B1（摘自LcTech）
此法检测成本低，可用等度HPLC直接测定
流动相：水/甲醇/乙腈:60/30/15 (v/v/v)
流速：1.2mL
进样量：100uL
色谱柱：RP C18
荧光检测：发射波长：365nm，接收波长：460nm
光化学衍生是一种简单、便宜、灵活的技术，可提高很多分析物质检测的灵敏度和选择性。黄曲霉素B1可在8分钟以内出峰，且检测信号明显增强
| 货号 |
名称 |
品牌 |
规格 |
| 46323-U |
黄曲霉素B1标准品 |
Supleco |
3ug/ml, 溶于苯:乙腈(98:2) |
| 12058 |
黄曲霉素免疫亲和柱 |
Afla |
AflaCLEAN 样品前处理柱 分析黄曲霉素- 25 columns/box |
| 1100-3348 |
UVE 光化学反应器 |
Pickering |
光化学反应器单元，240V |
| 10522 |
黄曲霉毒素分析柱RP C18 |
Lctech |
150×4.6mm |
| 10523 |
RP C18保护柱芯 |
Lctech |
3个/包 |
| 10750 |
保护柱套 |
Lctech |
1个 |
4根据《 GBT 17480-2008 饲料中黄曲霉毒素B1的测定酶联免疫吸附法》
LCTech AflaREAD ELISA试剂盒能够定量检测黄曲霉素B1，即使是浓度很小的黄曲霉素B1，也能够定量检测。ELISA试剂盒能够快速、容易的从多种产品中分析出黄曲霉素B1，如坚果、杏仁、大米、玉米、香料或动物饲料。AflaREAD 的检测限非常低，为0.1 ppb.
| 货号 |
名称 |
品牌 |
规格 |
| 11139 |
AflaREAD ELISA试剂盒 |
LcTech |
- ELISA 96孔板，
- 标准溶液1-8（0-5 ng/mL）
- 检测溶液
- 洗液
- 呈色溶液
- 终止液
- 稀释缓冲液
|
| 46323-U |
黄曲霉素B1标准品 |
Supleco |
3ug/ml, 溶于苯:乙腈(98:2) |
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