黄曲霉素的检测方法大全

实验与分析 0 2020-05-27

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黄曲霉素检测最初以薄层层析法为主，发展到高效液相色谱法、微柱法、酶联免疫吸附法等多种方法普遍应用，其进展与新的化学检测手段和新仪器的出现密不可分。

　　2011年蒙牛黄曲霉素事件让黄曲霉素走进了大众的视野，黄曲霉毒素(AFT)是迄今发现的霉菌毒素中毒性最大、对人类健康危害极为突出的一类霉菌毒素，有AFB1、AFB2、AFG1、AFG2等多种形式,它们存在于土壤、动植物、各种坚果中，特别是容易污染花生、玉米、稻米、大豆、小麦等粮油产品，对人和动物有强烈的毒性。

　　瓜子、花生、核桃、巴旦木、这些可都是小析姐最喜欢的零食，不止小析姐喜欢，黄曲霉也喜欢的紧，最近报道层出不穷，什么黄曲霉素导致肝癌啦，毒性是砒霜的68倍啦，想想自己的小身板，壮是壮了点，但也不至于百毒不侵啊，于是默默手动整理份检测方法，并郑重交到你们手上，可要好好守住检测这一关，这可事关小析姐的肝儿~~~~呀

　　黄曲霉素检测最初以薄层层析法为主，发展到高效液相色谱法、微柱法、酶联免疫吸附法等多种方法普遍应用，其进展与新的化学检测手段和新仪器的出现密不可分。这些新方法、新手段的快速应用，为黄曲霉毒素的检测提供了更广泛的选择余地，适应了不同的检测目的和要求。

　　薄层分析法(TLC)

　　TLC法是检测黄曲霉素最为经典的方法，也是以前最为常用的方法，至今仍为一些检测机构所用，也是一种国标方法。其原理是针对不同的试样，用适宜的萃取溶剂将黄曲霉素从试样中萃取出来，经柱层析净化后，再在薄板上展开后分离。利用黄曲霉素的荧光特性，根据荧光斑点的强弱与标准比较确定其含量，对于一些组分很复杂的试样要双向展开，才能获得较高的灵敏度。

　　TLC法设备简单，检测费用低，但操作繁琐、费时，萃取和净化效果不理想，灵敏度差，对操作人员的身体健康存在较大程度的危害。

　　液相色谱法(HPLC)

　　液相色谱法是20世纪80年代发展起来的检测黄曲霉毒素的方法，主要是用荧光检测器检测，这一检测方法将化学分析与领先的计算机技术相结合，使自动化程度得到极大提高，在实验空间、人力和仪器都保持不变的情况下，能检测更多的样品。其原理是根据衍生后的黄曲霉毒素在固定相和流动相之间的分配量不同，从而达到分离的目的，分离后的黄曲霉毒素能发射特征性荧光，被荧光检测器捕获后得到检测。该方法既可采用正相色谱也可采用反相色谱。正相色谱中固定相一般使用硅胶柱，流动相使用以50%水饱和的三氯甲烷：环己烷：乙腈：乙醇。反相色谱固定相为C18，流动相为乙酸：乙腈：异丙醇：水(1∶5∶5∶39)。

　　该法能准确地分离不同种类的黄曲霉素(例如：AFB1、AFB2、AFG1和AFM1等)，检测速度快且定性与定量准确，检测限低，可作为仲裁法使用，但仪器设备价格昂贵，前处理方法相对繁琐，若用到免疫亲和柱则会使试样检测费用增加，对操作人员的身体健康仍存在一定的危害。

　　酶联免疫法(ELISA)

　　ELISA法也是近年来研究开发出来的一种较为新颖的方法。ELISA 法测定黄曲霉毒素时主要采用间接竞争酶联免疫吸附法，原理是将黄曲霉毒素的特异性抗体包被于聚苯乙烯微量反应板的孔穴中，再加入待测样品及酶标已知抗原，两者与特异性抗体进行免疫竞争反应，然后加入酶底物显色，利用酶标仪根据显色反应颜色的深浅进行定量。

　　该方法测定结果准确可靠，操作简便，所涉及仪器及试剂比较少，回收率高，实验步骤也比较简单，是目前国内外较为先进的黄曲霉毒素检测方法。但抗体寿命短且需要低温保存，测定时假阳性率比较高，适合于大量样品的筛查。

　　微柱筛选法

　　微柱筛选法是将样品提取液通过由氧化镁和硅镁吸附剂组成的微柱层析管，杂质被氧化铝吸附，黄曲霉素被硅镁吸附剂吸附，在365紫外线下呈蓝紫色荧光，其荧光强度在一定范围内与黄曲霉素的含量成正比，由于微柱不能分离AFB1、AFB2、AFG1、AFG2，故检测结果为黄曲霉素总量。

　　微柱法筛选黄曲霉素主要是用来检验黄曲霉素是否存在以及快速筛选出超样品。因此，微柱筛选法不能完成黄曲霉素筛选的整个过程，仅仅用于定性检验。

　　金标试纸法

　　金标试纸法，实际就是一种固相免疫分析法。其原理是利用抗体与抗原的特异性结合反应，可一步检测黄曲霉素。

　　该法可在5～10 min内完成对试样中黄曲霉素的定性测定，具有简单、快速的特点，且无须其他仪器设备的配合，既可在实验室中进行检测，也可在现场进行实地测定，但是其检测的准确度、精度有待进一步的研究。

　　生物传感器法

　　生物传感器是使用固定化技术将具有分子识别能力的生物活性物质与物理化学换能器结合，可以用来探测生物体内外的环境化学物质或与之起特异性交互作用后产生响应的一种装置。其中利用分子间特异亲和性制备的亲和型生物传感器为免疫传感器口。根据能量转换器所传导的物理或化学信号的不同，免疫传感器又可分为电化学免疫传感器、光学免疫传感器、压电晶体免疫传感器等。

　　由于生物传感器具有选择性高、响应快、操作简单、携带方便和适合于现场检测等优点，因此各国科研工作者正积极探索研制新型生物传感器用于检测黄曲霉素。

内容来源：实验与分析

责任编辑：展源

审　　核：何发

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