HE染色常见问题与解决对策

展源 0 2023-04-20

点赞 0 收藏

分享到

HE染色

HE染色，是法苏木精 - 伊红染色法 ( hematoxylin-eosin staining ) 简称，石蜡切片技术里常用的染色法之一。

苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ;伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。

1、切片在脱蜡后出现大片白色的斑点

原因:（1）烤(烘)片温度太低，玻片在脱蜡前没有充分烤(烘)干；（2）切片在二甲苯停留时间不足；（3）二甲苯使用过久，造成脱蜡不完全。

对策: 如果玻片是由于没有烤(烘)干 ,先用无水乙醇处理去除玻片上的水分，然后重新用二甲苯进行脱蜡处理。如果烤(烘)干不足的现象比较严重，可能导致切片脱落，则无法补救。如果白色斑点是由于切片在二甲苯停留时间不足造成，或使用的二甲苯过久，切片则需退回到二甲苯操作步骤，使其停留时间相对长些，或更换二甲苯，进行重新染色。

2、细胞核染色暗淡，即苏木精染色太淡

原因:（1）切片在苏木精染色液停留时间太短；（2）苏木精染色液过度氧化，失去染色能力，不能再继续使用；（3）分化步骤处理时间过长。如果是骨组织细胞核暗淡，则多数是由于脱钙过度造成。

对策：切片重新染色。如果组织在固定液固定时间过长，细胞核染色能力将减弱，须增加其在苏木精染色液的时间，或用一些方法增加组织的嗜碱性，以改善细胞核的着色。

3、细胞核过染，即苏木精染色太深，甚至苏木精染液的分布占据了细胞质的位置

原因：（1）切片在苏木精染色液停留过长；（2）切片太厚；（3）分化步骤时间太短。

对策：如果切片不是因为太厚，对切片进行重新染色，对于染色和分化时间做些适当的调整。如果确定是由于切片太厚导致的细胞核过染，则需要重新切片。

4、细胞核呈红、棕色改变

原因：苏木精染色液过度氧化和切片在苏木精染液染色后返蓝不足。

对策：首先，每次染色之前检查苏木精染色液的染色能力，发现氧化过度应及时更换。其次，可用流水、温水或弱碱性溶液如稀氨水、0. 2%碳酸氢钠等，在苏木精染色后，给切片以足够的蓝化时间。

5、伊红着色淡

原因：（1）伊红染液的pH值可能大于5；（2）蓝化液残留过多；（3）切片太薄；（4）切片经伊红染色后在乙醇脱水时间过长。

对策：检查伊红染液的pH值，如果必要的话，用乙酸将其调节在4～5之间，从而使伊红染色色彩艳丽。确保每次蓝化步骤完成后，使用的弱碱性溶液被充分洗去，玻片上没有残留的弱碱性溶液。检查切片的厚度。脱水时不要让切片在低浓度乙醇停留时间过长，因为含水多的低浓度乙醇会将伊红的颜色分化掉。

6、细胞质过染

原因：（1）伊红染色液浓度太高，特别是焰红燃料、四溴四氯荧光素钠的存在；（2）切片在伊红染色时间过长；（3）切片在伊红染色后经乙醇脱水步骤时过的太快，而使乙醇分化伊红的作用不能产生。

对策：适当稀释伊红染色液，减少伊红染色时间，或者使切片在乙醇脱水等步骤时，停留时间相对均匀。同样，也要检查切片的厚度是否合适。

7、切片中出现蓝黑色沉淀物

原因：苏木精染色液中的金属膜，黏附在玻片上。

对策：每天染色前仔细过滤苏木精染色液，或建议使用半氧化苏木精染色液，如Gill苏木精染色液,可以避免过多的金属膜产生。

8、显微镜下见切片内有大量水珠

原因：切片经梯度乙醇处理后没有完全脱水，导致二甲苯透明中性树胶封固后残留大量水分。

对策：移去盖玻片，用二甲苯溶解封固剂如中性树胶。将切片置入新鲜的无水乙醇中，待切片重新脱水完全后，用新二甲苯透明，中性树胶封固。所有用于脱水和透明的液体，在使用一定时间以后，应即时更换。

9、光镜下切片某些区域难以聚焦

原因：盖玻片上可能有封固切片的封固剂。

对策：移去盖玻片，重新用干净的盖玻片封片。

10、封固剂从盖玻片与载玻片之间的缝隙回缩

原因：（1）盖玻片弯曲或不平整；（2）封固剂含二甲苯过多，稀释过度。

对策：移去盖玻片，重新找一张盖玻片，用干净的封固剂封片。每天保证盛装封固剂的容器密封性良好，在封固结束的时候盖紧盖子。尽量使用小的容器盛装封固剂，一旦封固剂太粘稠，就可以废弃不再使用。

11、切片从脱蜡的二甲苯经过梯度乙醇进入水溶液时，水和玻片呈现乳白色混浊改变

原因：用于脱蜡的二甲苯没有被乙醇洗干净。

对策：更换洗涤二甲苯的乙醇液体，把切片重新放回无水乙醇，脱去玻片上的水分。

12、细胞核灰蓝

原因：（1）组织处理温度过高、过热，在石蜡停留的时间过长；（2）固定时间太短，接下来就直接在高浓度的乙醇中行脱水处理。

对策：理论上来说，加热处理仅在组织浸蜡步骤才使用，组织不能在热的蜡液中停留过长时间。如果由于某些原因不能进行下步包埋处理，完成浸蜡处理后的组织，可将组织连同塑料包埋盒一并放置在室温空气中，冷却凝固，以备包埋。待需要包埋时再重新加温直至石蜡融化即可。组织在处理前必须确保固定良好，脱水最好能从低浓度的乙醇开始。

13、切片中出现类似色素样的点状结晶和黑色光滑的细胞核

原因：切片封片前放置在空气中时间太长，以至于二甲苯挥发切片干燥所致。
对策：移去组织切片上的盖玻片和封固剂，重新处理。将切片水洗数分钟，然后重新脱水、透明、封固。封片过程中要保持组织切片的轻度湿润，尽量不要让其干燥。

内容来源： Super Lab

责任编辑：展源

审　　核：何发

【干货】细胞HE染色实验指南

2023-01-13
【实验干货】细胞HE染色实验指南

2024-04-12
实验干货 | 细胞HE染色实验指南

2023-03-31
你会做革兰氏染色吗？革兰氏染色关键点解析

2024-01-04
QC, IQC, IPQC, QA，到底是什么鬼?

2020-05-27
AAS法分析茶叶中的铅,镉,砷

2020-05-27
染色质免疫沉淀技术的应用

2020-05-27
你真的会做革兰氏染色实验么?今天来解析一下革兰氏染色的关键环节！

2024-04-12
为什么你做革兰氏染色不成功？

2024-04-02

HE染色常见问题与解决对策

相关文章