高效液相色谱中梯度方法观察到的鬼峰有许多可能的原因，然而几乎总有一个共同的机制即：当流动相具有较高的洗脱强度时，流动相中有紫外吸收的有机杂质在柱上聚焦成组分带，并随后在梯度中洗脱。这些流动相杂质的潜在“来源”是广泛的。鬼峰的其他原因包括流动相输送的物理或机械方面、样品引入和固定相效应。色谱图可能包含来自各种来源的鬼峰，这使得鬼峰问题的整体解决非常困难。

在下面的讨论中，更详细地说明了杂质聚焦机理，并讨论了一些新的和以前公认的原因以及识别和修复鬼峰问题的技巧。

流动相污染与能带压缩机制

在所有色谱中，纵向扩散会增加分离组分的带宽。在等度色谱高效液相色谱中，人们试图在纵向扩散变得不可控制和峰太宽之前洗脱组分。在梯度洗脱色谱中，存在动态压缩组分带的主动聚焦机制(带/峰压缩)。梯度高效液相色谱运行中观察到的峰宽是同步扩散和聚焦过程的产物。在线性溶剂梯度中，峰宽在整个过程中应该近似恒定。

聚焦机制可以合理化如下：想象一个组分带广泛扩散在高效液相色谱柱的顶部。当施加溶剂梯度时，带后部的有机溶剂浓度总是高于带前部。因此，带前的组分分子比带后的组分分子更强地被固定相保留。因此，带后的成分分子总是更快移动，任何落后的会被更强的洗脱液聚集，并更快地向前移动以赶上其余的。假设柱足够长并且梯度足够陡，峰值聚焦(或压缩)逐渐发展的扩散和聚焦过程的平衡决定最终峰值宽度的程度，如下图所示。纵向扩散通过使用较小直径的球形颗粒而最小化，例如3μm而不是5μm的二氧化硅。通过增加梯度陡度，频带压缩机制被最大化。

 

图1组分带通过提高洗脱强度的溶剂梯度被压缩的示意图

带聚焦机制可以类似地聚焦流动相中存在的有机杂质。在低洗脱剂浓度下表现出一定保留的杂质可能会随着梯度的进行而聚集成峰。同样的“痕量富集”机制被用于环境分析，其中农药和有机残留物从大量含水样品中装载到柱上，然后用聚焦溶剂梯度洗脱。在充分聚焦后，流动相鬼峰似乎与注入的分析物峰相同，然而，当聚焦不完全时，它们可能更宽或具有非典型形状。

图2为加入邻苯二甲酸二辛酯的流动相色谱图，显示了如何通过聚焦机制，在空白梯度运行中可以观察到流动相中约1纳克/毫升水平的杂质。尽管邻苯二甲酸二辛酯鬼峰很小，但它仍可能干扰药物分析中低水平有机杂质的定量。

理想的梯度HPLC流动相到达顶部该柱应仅包含预期的溶剂和试剂，绝对不包含其他任何物质。梯度高效液相色谱不是只分析样品，也分析流动相的杂质和仪器路径的溶剂。为了区分真实的分析物峰和这些系统(或鬼)峰，空白进样的检查是必不可少的。

 

图2为加入邻苯二甲酸二辛酯的流动相色谱图

1、水

用于梯度高效液相色谱的水必须尽可能纯净和新鲜。理想情况下，它应该不含微量有机物、无机物和微粒。幸运的是，对于忙碌的药物分析员来说，商业上可获得的设备可以满足实验室的需要，因此水不应该是一个问题，然而，为了获得好的结果，这些净化器系统必须被设置和保持在高标准。Milli-Q和Elga Maxima是能够提供这种质量的系统。这些系统的主要部件首先是重活性炭和5 μm预滤器(去除颗粒并将氯含量降低到亚克/毫升水平)、反渗透装置(去除大部分离子种类)和紫外线光氧化以杀死细菌和氧化有机种类。使用离子交换和碳吸附介质进一步降低无机和有机含量，并使用超微滤单元(0.05um)，最终去除细菌和细颗粒。系统应定期消毒和更换耗材。间歇循环还应定期重新净化系统中的水。

图3清洁和污染的梯度洗脱色谱的比较。

图3显示了梯度HPLC对水质的敏感性。表示使用75％甲醇的“梯度”的药物相关物质方法， 45分钟后甲醇升高至90％。上面的基线是相同的方法表现出严重的梯度鬼峰，使得分析无用。污染物在第一个等度周期结束时开始突破，最终随着洗脱液浓度的增加而被洗掉。这种严重系统污染的原因尚未完全确认，但强烈怀疑是由于一个被忽视和细菌感染的净水器系统造成的。杂质的保留范围非常广，与细菌污染产生的各种物质相当。当细菌被破坏时，它们的聚合分泌物和脂多糖细胞碎片仍保留在水中，这可能包括不容易通过吸附方法去除的极性物质。如果长时间连续使用高含水溶剂，细菌的“生物膜”可能会在仪器和管道内形成。高效液相色谱溶剂入口过滤器应定期更换或彻底清洗，因为这些过滤器的高表面积使其成为细菌的“迷宫般的避难所”。用纯甲醇或乙腈定期冲洗高含水溶剂管线将有助于限制微生物生长，用二氯甲烷进一步冲洗将完全去除系统中的任何脂质和油脂。

遇到的主要生物是革兰氏阴性菌(例如假单胞菌属)。)它可以在纯水中生存和生长，并在磷酸盐或醋酸盐等的存在下茁壮成长。它们在20-35℃下快速生长，只需几天就能在高效液相色谱洗脱液中检测到。低温储存会显著降低生长，但冷藏高效液相色谱洗脱液通常并不实用。贝里已经表明，即使pH 9缓冲液也不足以阻止生长。

我们自己的微生物学家建议使用至少15%甲醇的混合物来抑制细菌生长，其他人建议使用至少5%甲醇或乙腈。贝里曾提到使用0.04%(重量/体积)和0.00004%(重量/体积)之间的叠氮化钠作为水缓冲液中的抗菌剂，尽管由于储备溶液易于分解，多兰曾描述过制备0.004%(重量/体积)(0.4克在10升水洗脱液中)以便在低至210纳米的检测波长下有效使用。有些细菌对二氧化氯、季铵化合物和0.25%乙酸有抵抗力。通常，它们可以适应恶劣的条件，因此流动相玻璃器皿应该定期用有机溶剂清洗并完全干燥，而不是例行地用洗脱液“加满”。

细菌鬼峰问题的其他例子包括在高效液相色谱泵“密封-清洗”溶液中出现细菌生长情况。50:50乙腈：水密封清洗溶液的有机含量因蒸发而降低，随后细菌生长。用新鲜混合物替换“轻微混浊”的密封清洗溶液，可以完全去除色谱中的鬼峰。此外，绝不能使用实验室洗瓶来补充高效液相色谱洗脱液的水量。这种水不仅会被洗瓶塑料的提取物浸透，而且微生物的繁殖旺盛。

笔者也曾经遇到水产生鬼峰的例子。在与工厂进行分析方法转移时，有关物质的基线峰出现巨大干扰，(见下两图)，经排查后发现正常的基线图谱为娃哈哈纯净水，工厂采用车间自己生产的注射用水，取来后放置了两天，导致出现异常。

2、水中的无机杂质

现代反相高效液相色谱柱使用超纯(B类：酸洗或C类：:合成)二氧化硅，其痕量金属离子非常低。色谱柱的性能取决于保持这种低金属离子含量。用于梯度高效液相色谱的水必须完全去离子和纯化，这不仅是为了色谱柱，也是因为离子含量会对梯度基线产生影响。图4显示了去离子水和纯净水不足如何影响梯度基线的斜率。无保留的紫外吸收阴离子(如亚硝酸盐、硝酸盐)最有可能是吸光度变化的原因。

图4梯度基线是用Elga Maxima净化后的水和(2)单独反渗透净化的水获得的。

3、有机溶剂

正如多兰建议有机溶剂中的杂质会集中在反相高效液相色谱柱上，然后通过痕量富集和聚焦机制洗脱，这似乎不合逻辑。然而，必须记住，在梯度的早期，溶剂混合物具有相对较低的总洗脱强度，因此来自有机溶剂的杂质仍然可以以相同的方式保留和洗脱。事实上，已经表明，一些杂质可以被80%的有机物强烈保留，并且在90-100%有机物时作为鬼峰洗脱。认识到这一点后，我们才认为有机溶剂质量是一个重要问题。事实上，不同供应商之间，甚至产品批次之间的质量差异可能非常大。图5说明了我们在供应梯度级甲醇时遇到的一个问题。

特定甲醇批次的两个独立瓶给出空白梯度色谱图，显示严重污染的上痕量。然而，五个不同批次的甲醇给出了干净的空白，如较低的痕量所示；所有其他色谱条件都相同。当时，供应商自己对污染批次的质量控制测试实际上表明它是干净的，尽管测试程序是合适的，但批次污染发生在测试后的某个时间，大概是在装瓶过程中。自该事件以来，供应商实施了改进的制造和质量保证控制，以防止再次发生事故。然而，这个例子说明了梯度液相色谱对商业供应材料质量的敏感性。除非供应商意识到微量污染的问题，并且有一些有效的方法来防止不合适的产品单元到达消费者手中，否则劣质材料批次可能仍然会有。

 

图5受污染和清洁的甲醇批次的比较图

布里斯托尔描述了一种高效液相色谱方法，用于区分鬼峰是来自水还是二元体系的有机溶剂。为了评估源自水性组分的杂质，必须将不同体积的100%水(或水性缓冲液)加载到柱上然后运行一个梯度，寻找鬼峰高度的增加。如果装载90%的水和10%的有机溶剂，平衡时间加倍会使两种溶剂的杂质装载加倍，没有给出有用的信息。通过首先用10%有机洗脱液平衡系统，然后用30%有机洗脱液平衡系统后获得的梯度色谱图，可以突出有机溶剂的鬼峰。源自有机溶剂的鬼峰在从30%有机物开始的梯度中将更大。鬼峰尺寸的增加不是直接成比例的，因为杂质负载在梯度的早期也在一定程度上发生(见图7)。

 

图7测定水和乙腈中杂质引起的洗脱液鬼峰的来源

标记为“溶剂畸变”的峰来自于将乙腈引入纯水系统所引起的物理混合效应(或除气作用，见下文)。该峰形状不典型，其面积不会随100%水的额外负荷而变化；其他水杂质峰的尺寸加倍。这些色谱图中有趣的特征是，一般来说，源于水的鬼峰往往出现在色谱图的早期，而源于有机溶剂的鬼峰往往出现在后期。同样值得注意的是，30%有机物的起始混合物具有0%或10%起始条件更平滑的基线，因为混合物已经太强而不能有效地聚焦更亲水的水杂质。

备注：笔者在实际过程会经常遇到各个有机溶剂供应商之间的差异，在进行分析方法开发或者方法转移时都需要关注。

四氢呋喃是梯度高效液相色谱中非常有用的溶剂改性剂。它与水的紫外失配通常太大，不能单独使用，紫外截止值为212nm，但在甲醇或乙腈梯度下的恒定水平(1-10%)下，它可以具有很大的选择性效果。与其他溶剂一样，市售THF级高效液相色谱(不稳定)的质量是可变的，一些所谓的THF高效液相色谱剂供应品根本不足以满足梯度高效液相色谱的要求。如果使用稳定剂BHT (2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚)，BHT很容易在梯度中间形成典型的峰被观察到。

总之，适用于梯度高效液相色谱的合适质量的溶剂是可用的，但是人们需要对质量保持警惕，并且人们可能必须检查来自几个供应商的溶剂以找到最好的。

4、流动相试剂和添加剂

如果梯度色谱图包含鬼峰，并且已知水和有机溶剂通常具有良好的纯度，那么任何缓冲剂都是下一个可疑的。流动相越复杂，杂质和鬼峰出现的几率就越大。如果怀疑有添加剂，洗脱液应省略添加剂，以测试其对问题的贡献。磷酸盐和醋酸盐的纯度范围很广，许多不适合梯度高效液相色谱。用前述聚苯乙烯二乙烯基苯圆盘过滤含水缓冲组分在这里可能是合适的。市售三氟乙酸的质量也是可变的，试剂随着时间而氧化；老化TFA经常呈现浅棕色。图9显示了源自所用TFA的大约13.5分钟处的相当大的鬼峰。与高效液相色谱溶剂一样，我们努力购买最好质量的试剂。我们目前发现甲酸对于低酸碱度应用来说是一种更清洁的试剂。

图9不同等级三氟乙酸的比较

备注：在流动相中经常用到离子对试剂，如十二烷基硫酸钠等，这些离子对的质量需要在实验过程中予以关注，经常会在由于质量原因造成鬼峰。

5、邻苯二甲酸酯、塑料添加剂（如pH计）和空气中的有机物作为鬼峰

梯度高效液相色谱的洗脱液绝不能保存在塑料容器中。塑料中可能含有软化剂、抗氧化剂、稳定剂或颜色，这些物质可能会从材料中渗出并导致鬼峰问题。Gabler等人观察到，仅在一小时后，梯度鬼峰杂质从聚乙烯和聚丙烯容器中浸出到纯水中。对于梯度高效液相色谱，也不能用塑料量筒、移液管和洗瓶。尼尔森和多兰报道说，当一个酸度计探头插入到缓冲水溶液中时，会出现严重的鬼峰污染。虽然正如作者所指出的，最好取一小份洗脱液来测量酸碱度，而不是直接将酸碱度计探针插入流动相中，但杂质的确切来源尚未确定。

邻苯二甲酸酯是在树脂和聚合物中用作增塑剂的半挥发性液体。在聚氯乙烯中，它们可能存在于60%以上。自20世纪40年代以来，邻苯二甲酸酯每年以数百万吨的规模生产，现在广泛分布在世界各地，几乎在地球的所有表面都能检测到，甚至在北极圈内的浓度也在0.1至20纳克/米之间。

它们已在各种实验室材料中检测到，包括蒸馏水、溶剂、实验室空气、玻璃器皿、瓶盖、二氧化硅、氧化铝、滤纸、铝箔纸、硅藻土、试剂如硫酸钠、氯化钠、碳酸钙和离子交换材料。DEHP(邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯)在空气中的实验室浓度可能高达35纳克/米，取决于使用的材料。

使用LCMS，我们在使用乙腈和甲醇的高效液相色谱梯度色谱中检测到邻苯二甲酸二辛酯异构体作为梯度鬼峰。

图10梯度色谱显示梯度高效液相色谱级乙腈中邻苯二甲酸二辛酯的污染。

6、流动相玻璃器皿的污染

未经处理的玻璃具有活性表面，很难去除吸附的污染物，尤其是洗涤剂残留物。尼尔森和多兰报告了这些问题，并最终推荐用自来水冲洗玻璃器皿10次，用去离子水冲洗10次，以获得满意的结果。我们也经历过类似的困难，但建议使用非常热的自来水、纯水和有机溶剂。(热水似乎有助于释放长链洗涤剂。)张和他的同事还发现洗涤剂残留物干扰了甘油三酯检测，并报告说，它们通过多次水洗或稀释盐酸没有被去除。人们可以想象，在所有这些情况下，水的“硬度”可能会有一些影响，硬水清洗可能会更成功。

玻璃仍然是容纳梯度高效液相色谱溶剂的最合适的材料，但是将流动相玻璃器皿通过洗涤剂清洗程序如许多公司一样，只会使玻璃器皿比其他情况下更脏。对于高效液相色谱洗脱液，我们现在只使用纯水(如果使用盐)和干净的有机溶剂冲洗玻璃器皿。这适用于洗提液瓶、量筒、移液管和任何其他用于洗提液制备的玻璃器皿。

备注：高效液相色谱分析中使用的进样小瓶也是玻璃的，不同厂家的之间的质量也会不一样。如果不是一次性使用，防止污染以及玻璃材质中杂质的浸出、内容物与玻璃材质之间的作用也是出现鬼峰时的重点考虑对象。

鬼峰的其他来源

1、第一个原因是在梯度洗脱条件较晚且较强的情况下，固定相的“流失”增加。

这种效应更常见于全氟化和苯基型固定相。图11中的例子是与使用标准C18相的相同系统的第一次注射相比，使用全氟化固定相的运行的第一次注射。在这两种情况下，允许系统在运行开始前静置几个小时。固定相流失在梯度末端聚焦成一个宽峰。

 

图11 静置数小时后，使用全氟化柱(上痕量)和C18柱(下痕量)首次注射序列。随后注射全氟化柱显示出血较少。

根据流失率率和色谱方法，该问题可能仅在第一次注射时出现，在随后的注射中几乎不明显，或者可能在序列的所有注射中出现。

2、泵送和混合问题

在一些梯度方法中，在开始梯度之前，需要等度流动相一段时间。分析师可以选择如何实现这一点，并且这样做的方式会对梯度基线产生不同寻常的影响。图12中的梯度方法需要75%甲醇的流动相45分钟，然后在一分钟内变为90%甲醇，然后等度保持14分钟。实现这一目标的两种潜在方法是：(1)制备75%甲醇的洗脱液A和90%甲醇的洗脱液B，并将溶剂输送从100% A改为100% B(上图)。 (2)将洗脱液A配制成100%水，洗脱液B配制成100%甲醇，用仪器混合75%和90%的溶剂。(较低的轨迹。)

图12。混合相同洗脱剂组合物的不同方法

如果流动相如情况(1)中那样被预混合，则在55分钟观察到不寻常的鬼峰。这种效应在各种仪器上都能看到，通常在一个序列中的所有注射中都是相同的，但并不总是如此。它有时表现为正方形，有时表现为一两个峰，因此需要很长时间来确定这个问题的根源。该系统只有一个泵和一个低压混合阀，似乎洗脱液B的闲置和延迟启动是观察到的像差的原因。

可能的原因可能包括阀门泄漏或故障、溶解气体问题或某些物质进出流动相。高压混合系统在溶剂步骤中也给出了相当大的鬼峰，但是没有如低压系统所见的延迟像差。很明显，在这种情况下，最好保持两条溶剂管线的一些连续混合活性，而不是让其中一条保持静止。

3、注射和流动相脱气产生的“空气峰”

看起来与真实分析物峰几乎相同的假峰可能是由于无意中向系统中注入空气造成的。

在许多仪器上，在抽取样本后，针尖上可能会出现一小块空气，在失效的注射器中，这可能会由于虹吸效应而加剧，虹吸效应会将更多的空气吸入注射器。除非注入非常大量的空气，否则以这种方式注入的空气将在系统压力下立即被压缩并溶解到流动相中。流动相的富气塞将会以与化学分析物带相同的方式沿色谱柱纵向扩散。被空气饱和的流动相比脱气的流动相具有更高的吸收率，因此可以观察到气体饱和的流动相峰，其看起来非常像真实的分析物峰

图13。上图显示梯度系统色谱图(甲醇，265纳米)，在线脱气效率低。用氦气吹扫洗脱液后，产生较低的痕量。

也报道了充气样品溶剂出现相同问题。样品溶剂和流动相之间未溶解气体(特别是氧气)的量的差异产生相同的特征空气峰。溶解空气峰可能表现出显著的保留，保留时间为t0的2-3倍，这使得问题的识别非常困难。可以通过观察脱气样品注入时峰大小的变化来确认空气峰问题。

我们偶尔会遇到的另一个麻烦问题是不典型的“鱼翅”形状的峰，它具有尖锐的前沿，然后几乎线性下降到基线。这种类型的鬼峰也在文献中有报道。根据问题的严重程度，峰值的大小可能很小(仅1-10毫安)或很大(高达1毫安)。图13显示了18分钟内55-95%甲醇(265nm)的梯度。

上面的轨迹显示了几个鱼翅状的峰，这是由于在线脱气器效率低造成的。较低的痕量是在用氦气喷射溶剂后产生的。(本例中相当嘈杂的基线是由于输送系统中溶剂混合不良造成的)。这些峰值是由瞬时压降引起的，而不是杂质。空气气体在纯水和纯有机溶剂中的溶解度通常大于两者的混合物。因此，当空气饱和溶剂混合时，混合物对溶解气体的容量往往较低，并且会发生“脱气”。

在低压混合系统中(溶剂在泵前混合)，这可能会导致气泡出现在泵内，从而导致压降和吸光度的变化，检测器会立即记录下来。随后通常是压力的稳定恢复，因此是线性拖尾。在图13中不同程度地观察了前一种情况几次。在严重的情况下，气泡可能导致泵完全失效。(高压系统通常不会观察到这种现象，因为溶剂在进入泵之前不会混合。)在鱼翅峰之后，空气可以通过与前面描述的相同的机制呈现为空气峰。除了流动相脱气外，我们通常在检测器之后废液管线中添加30-40厘米的PEEK管。这增加了几磅/平方英寸的压力，并且在检测器之后减少柱后排气的趋势。

4、注射残留

如果含有高度保留成分的样品被注入到梯度系统中，而该梯度系统在其终点没有充分洗脱，那么这些成分可能在随后的注射过程中被洗脱。为了避免这个问题，分析员必须努力确保梯度系统运行到足够的溶剂浓度，以便在一次运行中洗脱所有样品成分。梯度系统的峰值聚焦能力可能会也可能不会将残留峰带到正常的分析物峰宽。通过将梯度运行到更高浓度的有机溶剂，或者通过在梯度末端应用更长的等度保持，可以容易地识别这个问题。

5、系统样本污染

与空气峰一样，样品污染可能会在等度和梯度高效液相色谱中导致鬼峰。Strasser和Varadi最近报告了两个出现鬼峰的例子——被注入样品溶液污染的隔垫。他们发现，在用聚四氟乙烯-橡胶隔垫覆盖的样品瓶的第二次和随后的注射中观察到鬼峰，而使用更惰性的聚四氟乙烯-硅-聚四氟乙烯隔垫观察到的鬼峰更少。第一次注射导致聚四氟乙烯膜破裂，使小瓶中的内容物暴露在橡胶隔膜的可萃取和可检测成分中。

在第二个例子中，他们发现用于植物清洗验证的拭子样本被植物操作者使用的乳胶橡胶手套的提取物污染。为了避免这种情况，在分析方法中规定了认可的手套类型。

6、流动相组分与固定相相互作用产生的鬼峰

虚峰和“空位峰”可以通过与固定相相互作用的流动相组分的吸附或位移来观察。随着流动相和注射溶剂的复杂性增加，通常在色谱开始时观察到的系统峰的复杂性也会增加。这种系统峰通常并不局限于非常靠近注射前沿，也不局限于大多数分析人员希望具有分析物的保留因子。文献中讨论了这些系统扰动的原因，包括用含有TFA和较大离子对试剂的系统观察到的注射前沿效应。

如何避免鬼峰

有时，尽管人们完全理解并尽最大努力去除梯度高效液相色谱鬼峰，但仍然不可能完全去除它们。如果可用的水、有机溶剂和试剂不够好，不能进一步纯化，或者仪器不能做得更好，仍有一些方法可以将鬼峰的严重性降至最低。

1、如果您的分析允许，较高的检测波长通常会导致较少的溶剂混合鬼峰、溶解的空气峰和低波长洗脱液杂质。

2、避免溶剂组成的低极限意味着亲水流动相杂质不会随着梯度的进展而聚集，基线通常更平滑。

3、清洁玻璃器皿和仪器。如前所述，流动相玻璃器皿只能用纯水(如果使用盐)清洗，然后清洗有机溶剂出口。如果检测到仪器受到细菌污染，则需要进行一些强力清洗，尤其是在高含水洗脱液已经使用很长时间的情况下。要去除微生物残留物，取下色谱柱并冲洗系统(但不冲洗检测器！)用0.5M氢氧化钠溶液，然后用适量的水。然后，通过用100%甲醇冲洗所有溶剂管线，接着用100%二氯甲烷冲洗，然后再用100%甲醇冲洗，可以有效地对仪器进行“脱脂”。

4、常规空白注射在反相梯度高效液相色谱中至关重要。它们对系统的清洁度和性能进行定期检查，并有助于集中精力解决棘手的鬼峰问题。最终，可能必须选择性地从样品色谱图的积分中忽略鬼峰。

5、电子基线减法如果鬼峰在与样品组分峰相似的保留时间出现，或者在可能出现的地方出现，则鬼峰可能会造成相当大的问题。绕过这个问题并同时校正基线漂移的一种方法是使用电子基线减法，但是在目前，使用这种技术的方法应该逐案验证。一般不建议使用。

备注：目前有种比较简单的方式：鬼峰补集柱

岛津公司开发的Ghost Trap DS 鬼峰捕集小柱，可以有效捕集流动相中的杂质。主要的特点是能够去除溶剂包括有机溶剂中的杂质。反相色谱梯度分析时，将小柱安装在梯度混合器和自动进样器之间，不仅能够去除流动相中的杂质，还可以有效捕集管路和混合器中的杂质。鬼峰补集柱也有造成延迟体积，如果使用离子对试剂可能会吸附离子对试剂影响组分的保留时间或浓度。（目前也有其他公司能够生产此类色谱柱，笔者也使用过，效果还是不错的。）

原文：Ghost peaks in reversed-phase gradient HPLC: a review and update

原作者：Stuart Williams