线性截距的意义及控制方式

张明 0 2024-03-29

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线性截距的意义及控制方式

关于分析方法验证线性考察是定量分析的基础和必要条件，定量是基于呈一元一次方程的线性关系进行的，除了需要考察相关系数以确定是否成线性，还必须考察回归方程的截距问题，通常使用两种方法，一种为Y轴截距绝对值与标准（100%）之比法，另一种为剩余标准差标准（100%）之比法，二种方法均能反应截距的大小，对于含量应该不大于2%，对于有关物质和残留溶剂应该不大于25%（建议不大于15%更科学）。

有人对于截距的要求不是很理解，认为只要测量线性的几个点之间相关系数达到要求及成线性了，那在这范围内的检测都应该是准确的，为什么要求截距呢？首先对于主物质的含量，一般是做80%~120%之间的线性，要求截距不大于2%，这是因为含量的回收率标准一般是98%~102%，我们一般检测的时候都用的是单点法，也就是默认线性过原点，截距是0，峰面积与浓度成正比，例如标准品浓度是1mg/ml，峰面积是1000，那峰面积是1000的时候可以得出样品的真实浓度是1.0mg/ml（如图1的测定曲线），但如果真实的线性曲线截距不等于0而是100，标准品浓度是1mg/ml，峰面积是1100，那样品峰面积1100的时候，如果用外标法即单点法计算的时候浓度激素1.1mg/ml了（如图1的真实曲线），但实际上样品的浓度是1.0mg/ml（即用标准曲线法计算所得），误差也就在1%左右，相对应的截距占标准峰面积的1%，因此也就得出截距在2%之内，那误差也就在±2%之间，在含量标准要求范围内，回收率也是合格的，如果截距超过2%，则误差就超过范围了，那在检测样品的时候可能就会出现含量不合格、回收率达不到要求的现象，而实际上含量是合格的。如果截距不符合要求，不说明方法不能定量，只是不能采用常用的一个对照浓度进行测定，需要采用多个浓度的标准曲线法进行。同理对于有关物质和残留溶剂，也是同样的道理。

图1

一般情况下，我们都想要含量的线性的截距在2%范围之内，有关物质和残留溶剂的线性的截距在25%范围之内，那为什么有些方法中的截距会超呢？可能原因有两种：首先是系统误差比较大，基质背景比较高或者仪器有污染导致，这时候可以把线性最低点加入线性中，一般可以把定量限这个点加入线性中，正常情况下可以把截距拉小；另一种可能是浓度太高，高浓度的时候峰面积已经有过载的迹象，这时候需要将样品浓度调小一些。

线性截距的意义及控制方式

以杂质线性截距为例进行说明。

化药杂质控制一般采用外标一点法进行，即默认线性通过原点，需评估线性偏离对测定结果的影响，Y轴截距的绝对值应在标准响应值的25%以内。

为什么是25%？

USP<621>system suitability-271页计算公式是对含量测定范围与系统适用性相关要求进行说明，相关要求不适用于有关物质控制。

但“RSD”与“限度范围要求”的相关性的计算公式，我们可以引申一下，RSD%=KB ꇌn/t90%,n-1，RSD为相对标准偏差，K为常数0.349，B为各论中给出的上限减去100%（引申为含量的范围要求），n为参考溶液重复进样的次数（3 ≤n ≤6），t90%是在n-1自由度90%的概率下的一组t值。

相对标准偏差要求

根据公式，若B为30%（即杂质回收率范围为70%-130%），则进样6次允许的最大RSD为12.7%。假设线性从限度浓度50%做到150%且50%、150%的点相对均值的波动幅度为12.7%，则Y轴截距的绝对值约为100%响应值的25%。如下所示：