如何校正紫外分光光度计？

张明 0 2024-11-13

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为了获得准确的研究结果，准确测得样品溶液的吸光度非常关键。一般来说，分析结果的不可靠性与偶然误差和系统误差有关。偶然误差影响测量的精密度，可通过足够数量测量的统计处理来减少;系统误差影响测量结果的准确度，可在大体相同实验条件下，用比较一种物质的准确测量结果，使系统误差统一起来。

一、紫外分光光度计 -紫外可见分光光度法

紫外分光光度计：根据物质的吸收光谱研究物质的成分、结构和物质间相互作用的有效手段。紫外分光光度计可以在紫外可见光区任意选择不同波长的光。物质的吸收光谱就是物质中的分子和原子吸收了入射光中的某些特定波长的光能量，相应地发生了分子振动能级跃迁和电子能级跃迁的结果。由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质就有其特有的、固定的吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或测定该物质的含量。

紫外可见分光光度法：紫外-可见分光光度法是在190〜800mn波长范围内测定物质的吸光度，用于鉴别、杂质检查和定量测定的方法。当光穿过被测物质溶液时，物质对光的吸收程度随光的波长不同而变化。因此，通过测定物质在不同波长处的吸光度，并绘制其吸光度与波长的关系图即得被测物质的吸收光谱。从吸收光谱中，可以确定最大吸收波长和最小吸收波物质的吸收光谱具有与其结构相关的特征性。因此，可以通过特定波长范围内样品的光谱与对照光谱或对照品光谱的比较，或通过确定最大吸收波长，或通过测量两个特定波长处的吸收比值而鉴别物质。用于定量时，在最大吸收波长处测量一定浓度样品溶液的吸光度，并与一定浓度的对照溶液的吸光度进行比较或采用吸收系数法求算出样品溶液的浓度。

二、仪器的校正和检定

波长：仪器波长的允许误差为：紫外光区± lnm , 500nm附近士 2nm。

由于环境境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。常用汞灯中的较强谱线 237. 83nm，253. 65nm，275. 28nm， 296. 73nm，313.16nm，
334.15nm， 365. 02nm，404. 66nm， 435. 83nm，546. 07nm 与576. 96nm；或用仪器中氘灯的486. 02nm与656.10nm谱线进行校正；钬玻璃在波长 279. 4nm，287. 5nm， 333. 7nm，360. 9nm，418. 5nm， 460. 0nm， 484. 5nm， 536. 2nm 与 637. 5nm 处有尖锐吸收峰，也可作波长校正用，但因来源不同或随着时间的推移会有微小的变化，使用时应注意；近年来，常使用高氯酸钬溶液校正双光束仪器，以10%高氯酸溶液为溶剂，配制含氧化钬（Ho203 ) 4 % 的溶液，该溶液的吸收峰波长为241. 13nm, 278. l0nm, 287. 18nm，333. 44nm，345.47nm,361, 31nm, 416. 28nm, 451. 30nm，485. 29nm, 536. 64nm和 640.52nm。

吸光度的准确度：可用重铬酸钾的硫酸溶液检定。

取在120℃干燥至恒重的基准重铬酸钾约60mg，精密称定，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000ml，在规定的波长处测定并计算其吸收系数，并与规定的吸收系数比较：

其关系可以用朗伯-比尔定律表述如下：

式中：

A为吸光度；

T为透光率；

E为吸收系数，常用的表示方法，其物理意义为当溶液浓度为1%（g/ml）,液层厚度为1cm时的吸光度数值；

c为100ml溶液中所含物质的重量（按干燥品或无水物计算），g；

杂散光的检查：可按下表所列的试剂和浓度，配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率,应符合表中的规定。

三、日常维护

一、温度和湿度是影响仪器性能的重要因素。他们可以引起机械部件的锈蚀，使金属镜面的光洁度下降，引起仪器机械部分的误差或性能下降；造成光学部件如光栅、反射镜、聚焦镜等的铝膜锈蚀，产生光能不足、杂散光、噪声等，甚至仪器停止工作，从而影响仪器寿命。维护保养时应定期加以校正。应具备四季恒湿的仪器室，配置恒温设备，特别是地处南方地区的实验室。

二、环境中的尘埃和腐蚀性气体亦可以影响机械系统的灵活性、降低各种限位开关、按键、光电偶合器的可靠性，也是造成必须学部件铝膜锈蚀的原因之一。因此必须定期清洁，保障环境和仪器室内卫生条件，防尘。

三、仪器使用一定周期后，内部会积累一定量的尘埃，最好由维修工程师或在工程师指导下定期开启仪器外罩对内部进行除尘工作，同时将各发热元件的散热器重新紧固，对光学盒的密封窗口进行清洁，必要时对光路进行校准，对机械部分进行清洁和必要的润滑，最后，恢复原状，再进行一些必要的检测、调校与记录。

内容来源：食品理化检测

责任编辑：展源

审　　核：何发

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