如何快速玩坏液相或液质

张明 0 2024-12-04

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液相液质色谱柱

液相色谱对于多数人来说都是很好上手的仪器了，但是就算是用过几年、经验丰富的分析员都会习惯于一些错误的操作（师傅教错了吗？），经常导致一些仪器故障。

方便快捷的分析过程固然重要，但是为了多做样品而忽略了一些必不可少的步骤，往往得不偿失，哪些操作不能做？哪些懒儿不能偷？那些小概率的故障师傅没教怎么办？液相使用过程中有哪四大关键因素要注意？本文一一告诉你哦！

快速玩坏液相或液质小技巧

1、流动相不过滤，因为尘埃或其它任何杂质微粒都会磨损柱塞、密封环、缸体和单向阀，因此应预先除去流动相中的任何固体微粒。流动相最好在玻璃容器内蒸馏，而常用的方法是滤过，可采用Millipore滤膜（0.2μm或0.45μm）等滤器。泵的入口都应连接砂滤棒（或片）。输液泵的滤器应经常清洗或更换。

2、使用缓冲盐流动相前，不先用高比例水相过渡色谱柱。使用时梯度后面有机相比例过高导致盐析。色谱柱用完缓冲盐不冲洗。.液相系统中的缓冲盐不及时冲洗置换。高浓度缓冲盐流动相不过滤(基线噪声大)。

3、使用后没有及时清洗泵，流动相不应含有任何腐蚀性物质，含有缓冲液的流动相不应保留在泵内，尤其是在停泵过夜或更长时间的情况下。如果将含缓冲液的流动相留在泵内，由于蒸发或泄漏，甚至只是由于溶液的静置，就可能析出盐的微细晶体，这些晶体将和上述固体微粒一样损坏密封环和柱塞等。因此，必须泵入纯水将泵充分清洗后，再换成适合于色谱柱保存和有利于泵维护的溶剂（对于反相键合硅胶固定相，可以是甲醇或甲醇-水）。

4、色谱柱从仪器上取下来，不封堵头。流动相水相不定时更换(尤其在夏天，缓冲盐更容易滋生细菌)。流动相标签内容不更新。更换流动相时不注意是否互溶。

5、仪器使用记录不及时更新。样品配制，不用天平称量，直接挖一点溶解。复杂的样品溶解后不过滤直接进样。流动相配制，不用量筒量取，直接用溶剂瓶上的刻度。

6、色谱柱使用与维护，色谱柱平衡时间不够，导致出峰异常或重现性差。一般说来色谱柱不能反冲，只有生产者指明该柱可以反冲时，才可以反冲除去留在柱头的杂质。否则反冲会迅速降低柱效。选择使用适宜的流动相（尤其是pH），以避免固定相被破坏。有时可以在进样器前面连接一预柱，分析柱是键合硅胶时，预柱为硅胶，可使流动相在进入分析柱之前预先被硅胶“饱和” ，避免分析柱中的硅胶基质被溶解。避免将基质复杂的样品尤其是生物样品直接注入柱内，需要对样品进行预处理或者在进样器和色谱柱之间连接一保护柱。保护柱一般是填有相似固定相的短柱。保护柱可以而且应该经常更换。

7、序列排完忘记设置关机或待机程序。排序列没有计算流动相的用量，导致流动相不足走空。不注意观察废液瓶中废液量，过夜排样，导致废液溢出。

8、手动进样时，进样针插在进样阀上不拔出，不清洗进样针和进样阀。手动进样针取样时将样品直接喷到空气中。自动进样器运行取样时，伸手去拿取更换样品瓶，导致手指被夹或仪器故障。

9、Purge时忘记打开Purge阀，导致超压。

以上情况大家对号入座，色谱实验过程中，尽量严格要求自己，以免造成严重后果。

液相色谱在使用过程中主要有四大关键因素需要注意

液相色谱仪本身：对于仪器本身一般不会有问题，特别是刚买回来的新仪器。对于仪器本身最重要的就是仪器的校验，刚买回来的仪器一般都是由卖家先对仪器做系统的确认工作（包括IQ、PQ、OQ），确认顺利通过后，再请国家或省级仪器检定局的来校验，检定合格后就可以放心使用了，除此之外，一些做得好的公司每半年会对仪器进行一次的内部校验，目的就是为了保证仪器的正常可运行状态。

操作人员：色谱条件一般包括流动相、色谱柱、检测波长、流速及进样量。流动相就涉及到配制流动相所用到的水和试剂试液，水一般要求用超纯水或其他水的电阻率不大于18.2兆欧级别，试剂试液要求用色谱级别的，原因为防止水和试剂试液中的杂质对色谱结果的干扰。

色谱柱会因不同的品种而有不同的要求，但每根色谱柱都有它的清洗要求，这个在色谱柱说明书上都可以找到，一定要根据上面的要求进行，否则会造成色谱柱效下降和色谱柱的使用寿命缩短，检测波长也会因品种的不同有不同的要求。这里需要指出的是要注意观察检测器氘灯能量的变化，比如基线波动大，活性成分的响应值突然变小等，都有可能是氘灯的能量不足所引起的，氘灯一般建议使用800小时，但实际上使用时间不止，可根据实际情况更换。

流速也因品种的不同而不同，一般为1.0ml/min，流速是不可随意改动的，特别是作为QC人员，但是作为研发人员，有时为了摸索条件或进行方法耐用性验证，会对流速进行改变以评价方法的适用性。对于进样量因不同的品种也有不同规定，进样量这块现在都使用自动进样，所以进样精密度都很好，不需强调什么。

操作人员：首先，作为液相操作人员，一定要认真学习液相的说明书，掌握液相硬件和软件的操作，掌握日常的维护保养，掌握最基础故障的排除和维修。

一般液相的操作规程也是有操作人员起草的，所以只要严格按照操作要求进行操作，一般不会出现问题。当然啫喱需要特别指出的是对于液相的日常维护保养很重要，比如流动相的过滤、脱气、泵密封垫的清洗、系统管路的清洗、溶剂过滤头的清洗等，倘若不坚持，很容易导致色谱柱堵塞、系统压力过大、色谱峰异常等不必要的故障，浪费时间。

其次，操作人员在配制液相分析用样品溶液时，最好由同一个人单独完成，以免不必要的偶然误差。

液相安装环境：液相色谱仪应尽量安装于水平、远离振动、电磁干扰的屋内的台面上，有条件的话尽量将液相数据处理系统分隔开，一个是防止色谱基线噪音偏大，基线不稳等，一个是为减少对人体的危害。

内容来源：质谱学堂

责任编辑：展源

审　　核：何发

如何快速玩坏液相或液质

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