如何解决高效液相色谱基线不稳定的问题？

张明 0 2025-01-20

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在高效液相色谱分析中，基线是指色谱柱经流动相冲洗，与流动相达到平衡后，检测器在一段时间内测出的信号曲线。在色谱仪各项检测条件正常的情况下，基线应平行于时间轴。然而，在色谱仪器运行时，由于检测条件的变化，会引起的信号线的位置发生变化，从而出现基线漂移或是基线不稳的状况。

引起基线不稳的因素很多，从外部因素来看，电源电压太低或波动太大或是桥路配置电位器接触不良都会造成基线不稳定；从内部因素来看，样品的处理、温度的控制、系统流路的清洁等因素也会影响基线的稳定性。当发生基线不稳的情况时，要及时检修并排除故障，以防影响检测的准确性。

高效液相色谱分析中，基线不稳定的原因一般是硬件引起的，可以从两个大方向去判断：

01 产品质量方面的故障

仪器本身的电噪声，仪器无法屏蔽产品的外部信号的干扰信号，工作站软件的信号线连接时接触非仪器方面的输入信号，都会引起基线的规则性波动和突发性波动；这种不稳定一般可以通过基线信号的规律判断出来的。

02 使用和维护范围内的基线不稳定

流动相流路中有气泡会引起规律性的小波动；色谱柱污染则会导致基线大幅度的波动和各种不规则的出峰，检测器污染也会导致基线的不稳定。

1.柱温波动

即使是很小的温度变化都会引起基线的波动。通常影响示差检测器、电导检测器、较低灵敏度的紫外检测器或其它光电类检测器。

解决办法：控制好柱子和流动相的温度，在检测器之前使用热交换器图。

2.流动相不均匀

流动相条件变化引起的基线漂移大于温度导致的漂移。

解决办法：使用HPLC级的溶剂，高纯度的盐和添加剂。流动相在使用前进行脱气，使用中使用氦气。

3.流通池被污染或有气体

解决办法：用甲醇或其他强极性溶剂冲洗流通池。如有需要，可以用1N的硝酸。（不要用盐酸）

4.检测器出口阻塞

高压造成流通池窗口破裂，产生噪音基线。

解决办法：取出阻塞物或更换管子。参考检测器手册更换流通池窗。

5.流动相配比不当或流速变化

解决办法：更改配比或流速。为避免这个问题可定期检查流动相组成及流速。

6.柱平衡慢

特别是流动相发生变化时

解决办法：用中等强度的溶剂进行冲洗，更改流动相时，在分析前用10-20倍体积的新流动相对柱子进行冲洗。

7.流动相污染、变质或由低品质溶剂配成

解决办法：检查流动相的组成。使用高品质的化学试剂及HPLC级的溶剂

8.样品中有强保留的物质

样品中有强保留的物质（高K值）以馒头峰样被洗脱出，从而表现出一个逐步升高的基线。

解决办法：使用保护柱，如有必要，在进样之间或在分析过程中，定期用强溶剂冲洗柱子。

9.使用循环溶剂，但检测器未调整

解决办法：重新设定基线。当检测器动力学范围发生变化时，使用新的流动相。

10.检测器没有设定在最大吸收波长处

解决办法：将波长调整至最大吸收波长处。

内容来源：研创手性科技

责任编辑：展源

审　　核：何发