长期存活:维持菌种代谢停滞,减少遗传变异;
防止污染:杜绝杂菌入侵;
便捷取用:快速复活且性状稳定。
原理:利用低温(4℃)减缓代谢,固体培养基短期维持菌种活性。
操作步骤:接种至斜面培养基→培养至菌苔丰满→封口膜密封→4℃保存。
保存时间:1-3个月(细菌)、3-6个月(真菌)。
优点:成本低、操作简单、无需特殊设备。
缺点:易污染、保存期短、频繁传代易变异。
适用场景:短期实验或菌种日常使用。
原理:石蜡隔绝氧气,抑制代谢并防止培养基干燥。
操作步骤:斜面培养菌种→无菌石蜡覆盖斜面→直立放置→4℃保存。
保存时间:6-12个月。
优点:延长斜面保存期,适合不产孢子的微生物。
缺点:取菌时易污染,石蜡易燃需谨慎操作。
适用场景:放线菌、酵母等非严格厌氧菌的中期保存。
原理:甘油作为冷冻保护剂,-80℃超低温抑制细胞损伤。
操作步骤:菌液与40%甘油等体积混合→分装至冻存管→-80℃保存。
保存时间:1-2年(细菌)、5年以上(部分真菌)。
优点:复活率高(>90%)、操作标准化、适合高通量保存。
缺点:依赖-80℃冰箱,断电风险需备份。
适用场景:大肠杆菌、酵母等常用模式菌的长期保存。
原理:真空条件下升华脱水,使微生物进入休眠状态。
操作步骤:菌液与保护剂(如脱脂奶)混合→预冻→真空干燥→封口。
保存时间:5-10年甚至更久。
优点:保存期极长、稳定性高、便于运输。
缺点:设备昂贵(冻干机)、操作复杂、部分菌种存活率低。
适用场景:专利菌株、标准菌种库的永久保存。
原理:-196℃液氮彻底终止代谢,细胞进入“假死”状态。
操作步骤:菌液与冷冻保护剂(如DMSO)混合→程序降温→投入液氮罐。
保存时间:10年以上。
优点:保存期最长、遗传稳定性最佳。
缺点:液氮补充成本高、操作危险(冻伤、爆炸风险)。
适用场景:珍稀菌种、细胞系或遗传工程菌的终极保存。
日常使用:斜面低温+甘油管备份;
长期保种:冻干+液氮双保险;
菌种交换:冻干粉(无需冷链运输)。
预算有限:优先甘油管法(-80℃冰箱普及率高);
无超低温设备:液体石蜡覆盖法延长斜面保存期。
产孢子菌(如芽孢杆菌):冻干保存效果极佳;
厌氧菌:避免液体石蜡法(氧气残留),改用甘油管+厌氧袋。
污染:保存前严格纯化,添加抗生素(如放线菌酮抑制真菌)。
失活:优化保护剂(如海藻糖提升冻存存活率)。
标签脱落:使用耐低温油性笔,电子数据库备份信息。
磁珠保存法:菌液吸附于磁珠,-80℃保存,取用便捷;
菌种DNA库:保存基因组DNA+复苏时人工合成(适用于极端难培养菌)。
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何发
2023-06-21
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