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实验室菌株保存指南：5大常用方法优缺点对比！

张明 14 2025-03-14

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实验室菌株

实验室菌株保存指南：5大常用方法优缺点对比！

一、实验室菌株保存的核心目标

长期存活：维持菌种代谢停滞，减少遗传变异；
防止污染：杜绝杂菌入侵；
便捷取用：快速复活且性状稳定。

二、5大常见保存方法详解与对比

1. 斜面低温保存法

原理：利用低温（4℃）减缓代谢，固体培养基短期维持菌种活性。
操作步骤：接种至斜面培养基→培养至菌苔丰满→封口膜密封→4℃保存。
保存时间：1-3个月（细菌）、3-6个月（真菌）。
优点：成本低、操作简单、无需特殊设备。
缺点：易污染、保存期短、频繁传代易变异。
适用场景：短期实验或菌种日常使用。

2. 液体石蜡覆盖法

原理：石蜡隔绝氧气，抑制代谢并防止培养基干燥。
操作步骤：斜面培养菌种→无菌石蜡覆盖斜面→直立放置→4℃保存。
保存时间：6-12个月。
优点：延长斜面保存期，适合不产孢子的微生物。
缺点：取菌时易污染，石蜡易燃需谨慎操作。
适用场景：放线菌、酵母等非严格厌氧菌的中期保存。

3. 甘油管冷冻保存法

原理：甘油作为冷冻保护剂，-80℃超低温抑制细胞损伤。
操作步骤：菌液与40%甘油等体积混合→分装至冻存管→-80℃保存。
保存时间：1-2年（细菌）、5年以上（部分真菌）。
优点：复活率高（>90%）、操作标准化、适合高通量保存。
缺点：依赖-80℃冰箱，断电风险需备份。
适用场景：大肠杆菌、酵母等常用模式菌的长期保存。

4. 冷冻干燥（冻干）保存法

原理：真空条件下升华脱水，使微生物进入休眠状态。
操作步骤：菌液与保护剂（如脱脂奶）混合→预冻→真空干燥→封口。
保存时间：5-10年甚至更久。
优点：保存期极长、稳定性高、便于运输。
缺点：设备昂贵（冻干机）、操作复杂、部分菌种存活率低。
适用场景：专利菌株、标准菌种库的永久保存。

5. 液氮超低温保存法

原理：-196℃液氮彻底终止代谢，细胞进入“假死”状态。
操作步骤：菌液与冷冻保护剂（如DMSO）混合→程序降温→投入液氮罐。
保存时间：10年以上。
优点：保存期最长、遗传稳定性最佳。
缺点：液氮补充成本高、操作危险（冻伤、爆炸风险）。
适用场景：珍稀菌种、细胞系或遗传工程菌的终极保存。

三、5大方法综合对比表

四、如何选择最佳保存方案？

1. 根据保存目的

日常使用：斜面低温+甘油管备份；
长期保种：冻干+液氮双保险；
菌种交换：冻干粉（无需冷链运输）。

2. 根据实验室条件

预算有限：优先甘油管法（-80℃冰箱普及率高）；
无超低温设备：液体石蜡覆盖法延长斜面保存期。

3. 菌种特性适配

产孢子菌（如芽孢杆菌）：冻干保存效果极佳；
厌氧菌：避免液体石蜡法（氧气残留），改用甘油管+厌氧袋。

五、菌株保存的常见翻车现场与应对

污染：保存前严格纯化，添加抗生素（如放线菌酮抑制真菌）。
失活：优化保护剂（如海藻糖提升冻存存活率）。
标签脱落：使用耐低温油性笔，电子数据库备份信息。

六、更智能的保存技术

磁珠保存法：菌液吸附于磁珠，-80℃保存，取用便捷；
菌种DNA库：保存基因组DNA+复苏时人工合成（适用于极端难培养菌）。

内容来源：网络

责任编辑：展源

审　　核：何发

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