色谱柱与仪器关联常见问题

张明 2025-05-09

色谱柱与仪器关联常见问题

01压力

柱压-仪器

常见现象

压力升高、降低或不稳定

原因分析

①仪器管路堵塞；

②泄漏、流动相抽空、溶剂管道滤芯堵塞；

③系统中有气泡；

应对方法

①从泵到检测器做一个系统性的检查以确定堵塞发生的部位；

②检查各接口处，检查流动相，超声清洗或更换溶剂管道滤芯；

③流动相使用前超声，排气。

柱压-色谱柱

常见现象

柱头塌陷，反压上升，柱效下降。

原因分析

①流速过大，会引起高柱压或柱压升高过快，特别是当使用粘度高的溶剂（如IPA, EtOH）；

②流动相或样品溶液过滤不彻底，固体颗粒堵塞管路或柱头，会引起柱压过高；

③样品中成分在柱头析出或强烈吸附，会引起柱压升高。

应对方法

①如柱子之前使用了黏度大的溶剂而引起柱压升高，建议使用小流速先置换之前的溶剂，待柱压下降并稳定后再进样检测；

②因柱压问题引起的柱头塌陷，无法恢复柱子性能，出现异常后可尝试反接色谱柱进行实验；

③每种柱子有特定的承压范围，请仔细参照相应的《色谱柱说明书》；

④更换流动相时，或者把柱子刚接上仪器的时候，逐步增加流速；

⑤彻底过滤流动相及样品溶液；

⑥样品预处理；

⑦仪器设定保护柱压。

02 基线

常见现象

基线漂移、基线噪音大。

原因分析

①柱温变化；

②流动相混合不均匀；

③流通池污染或有气泡；

④色谱柱平衡慢，尤其是流动相组成发生较大的改变；

⑤漏液；

⑥色谱柱污染。

应对方法

①控制实验室温度及柱温箱温度；

②使用HPLC溶剂，高纯度的盐和添加剂，流动相在使用前进行脱气；一天以上未使用流动相，用前轻轻晃动瓶子使流动相均匀；

③清洗流通池，流动相在使用前脱气；

④先用中等强度的溶剂冲洗柱子；

⑤注意压力，排查漏液的地方并加以排除；

⑥定期对柱子用强洗脱溶剂（在柱子使用范围内）进行冲洗。

03 峰形

常见现象：峰前沿、拖尾、肩峰等。

问题一：峰前沿

原因分析

①柱温引起的峰前沿；

②样品溶剂与流动相不兼容；

③色谱柱前端过滤筛板堵塞；

④柱效降低；

⑤柱头塌陷。

应对方法

①提高温度有时能消除前沿；

②增加流动相极性或样品用流动相溶解；

③更换筛板。如前延峰很快再次出现，注意检查颗粒物来源（样品，流动相，泵，进样阀）

④冲洗色谱柱或更换色谱柱，推荐使用保护柱；

⑤更换色谱柱。

问题二：峰拖尾

原因分析

①样品超载；

②杂质峰干扰；

③硅羟基作用；

④洗脱强度不够；

⑤死体积或柱外体积过大；

⑥柱效降低；

⑦柱头塌陷。

应对方法

①减小进样量或稀释样品浓度；

②纯化样品或调节流动相比例，使杂质不干扰主峰；

③硅羟基作用；

④在柱子可使用的溶剂范国内增加洗脱强度；

⑤连接点空隙降低，尽量选用细管线；

⑥冲洗色谱柱或更换色谱柱，推荐使用保护柱；

⑦更换色谱柱。

问题三：肩峰

原因分析

①色谱柱或保护柱入口端污染；

②样品溶剂与流动相不兼容；

③干扰峰；

④色谱柱损坏。

应对方法

①使用强溶剂清洗色谱柱或更换色谱柱，必要时可以反冲，更换保护柱；

②用流动相稀释样品；

③可能是样品中纯在的物质与目标物未分离，需要调节方法（调节流动相或更换色谱柱）改变选择性，可能是系统中引入的污染物，通过空白溶液进行排查；

④更换色谱柱。

04 误进溶剂

常见现象

柱压剧增，分离突然变差。

原因分析

①涂敷型产品（Y1-Y5）若导入错误的溶剂(如二氯甲烷、四氢呋喃、乙酸乙酯、甲苯等)，柱子会马上被破坏；

②正相手性柱的保存溶液和常用流动相多数含有大比例的正己烷，而正己烷和甲醇、乙腈、水互溶性很差，如没有经过合适的溶剂置换，误进和柱子中原有的溶剂不互溶的溶剂，柱压也可能被破坏。

应对方法

①一旦错误地使用了溶剂，重新恢复柱子性能的可能性很低；

②立即停泵，取下柱子，先用合适的溶剂（如乙醇）置换仪器之前的溶剂，再接上柱子低流速冲洗（至少20倍柱体积）置换柱子中误进的溶剂。

05 残留效应

常见现象

方法重现性差。

原因分析

①残留物在普通流动相中可长时间地稳定保留，“老化”柱子；

②实验后柱清洗没做好。

应对方法

①问题出现后可尝试进行冲洗后再使用；

②用“旧柱”开发的方法，必须在新柱上进行确认。

内容来源：研发分析之路

责任编辑：展源

审　　核：何发

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