【必看】微生物平板划线
2025-12-12
划出标准且美观的单菌落是微生物实验的一项核心基本功。这需要规范的操作和一定的练习。遵循以下步骤和技巧，你很快就能掌握。
通过“稀释”的原理，在平板表面将微生物逐步分散，最终形成由单个细菌繁殖而来的、孤立的、形态标准的菌落。
标准操作步骤（以四区划线法为例）
准备工作：
无菌环境：
在超净工作台或酒精灯火焰旁的无菌区域操作。 标记：
在平板底部（有培养基的一面）标记菌株名称、日期。 预热：
点燃酒精灯，将接种环的金属丝部分在火焰外焰中灼烧至红热，并灼烧整个金属丝长度，灭菌。 冷却：
将红热的接种环在平板边缘的空白培养基表面或空气中冷却数秒（至关重要！避免烫死待接种的菌种）。 取菌：
用无菌手法打开含菌种的试管或平板，用冷却的接种环轻触单个菌落或菌苔，沾取少量菌体（肉眼刚能看见痕迹即可，宁少勿多）。
划线操作（四区法）：
第一区（A区）：
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将沾有菌种的接种环，在平板培养基表面约1/4的区域（A区）内，轻轻地、紧密地划出3-5条平行线或连续之字形线。划线时接种环与平板表面成 30-45度角，力度要轻，不要划破培养基。 -
此区域菌量最多，线条密集。 第二区（B区）：
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将接种环在火焰上再次灼烧、冷却。 -
将接种环仅接触第一区线条的末端1-2次，然后在紧邻的1/4区域（B区）划出新的线条。新线条应与第一区的末端有少量重叠，然后向空白区延伸。 -
划4-6条线，覆盖B区。此区域菌量被稀释。 第三区（C区）与第四区（D区）：
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重复“灼烧-冷却-接触前一区末端-划线”的步骤
。 -
每一新区都只接触前一区的末端，进行进一步稀释。 -
到第四区（D区）时，接种环上的菌量已非常少，最有可能划出分散的单菌落。
完成：
-
划线完成后，盖上皿盖。将接种环彻底灼烧灭菌后放下。 -
将平板倒置（皿盖在下，皿底在上），放入恒温培养箱培养。倒置可防止冷凝水滴落冲散菌落。 
划出“美观”单菌落的关键技巧
取菌量是关键！
“看不见的取菌量”是最好的起点。如果第一区线条就很浓密，后面很难分开。 充分冷却接种环！
热环会杀死细菌，导致划线失败。 力度要轻柔：
轻轻抚表面。划破琼脂会影响菌落形态，也容易交叉污染。 线条流畅且密集：
第一、二区的线条应紧密，才能有效“挂”住菌体。后两区可以稍稀疏。 分区清晰，不回头：
划新区时，线条绝对不能回头接触到高浓度区。一旦接触，稀释作用就破坏了。 “字”不要写太大：
每区的划线范围不要超过平板的1/4，为后续区域留出足够空间。 使用合适的工具：
新手可以使用一次性塑料接种环，硬度适中，不易划破平板。熟练后可使用金属环。 练习手腕动作：
以手腕为轴心，平稳移动手臂，而不是僵硬地移动整个胳膊。
常见问题与解决方案
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|---|---|---|
| 整个平板长成一片菌苔 |
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| 只有第一区长菌，后面无菌 |
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| 菌落全在划线上，线间无菌 |
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| 菌落分布不均匀，不美观 |
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| 划破了培养基 |
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“美观”的标准
单菌落分离度好：
在第三、四区有大量彼此分离的独立菌落。 菌落形态典型：
菌落大小均匀，边缘整齐，能清晰展示该菌种的固有形态（圆形、光滑等）。 划线区域整洁：
线条流畅，分区明显，无杂菌污染，平板无划痕。 整体观感：
看起来清晰、专业，像一件“作品”。
最后，多加练习！ 这是最有效的途径。可以用旧平板（无培养基）或直接在纸上练习手腕动作和力度控制，熟练后再用真实菌种操作。
微生物菌种网
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何发
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